Hep - 53.4 células de cáncer de hígado de ratón

Información básica

Nombre de la célula:Hep - 53.4 células de cáncer de hígado de ratón

Alias celular:HEP-53.4 ; 53,4; Células de cáncer de hígado de ratón

Fuente celular:Alemania

Identificación celular:Se ha aprobado la identificación Str

Morfología celular:Células similares a la epidermis, crecimiento pegado a la pared

Base de cultivo:Dmem (incluido NaHCO3 1,5g / l) (basmed - AW - 013) + FBS 10% + P / s1%

Condiciones de cultivo:Fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 grados centígrados, humedad de la incubadora 70% - 80%

Condiciones de congelación:Criopreservación sin suero, almacenamiento de nitrógeno líquido

Fondo celular:Derivados del carcinoma hepatocelular primario en ratones c57bl / 6j, que representan fielmente el carcinoma hepatocelular y proporcionan modelos valiosos para el estudio de este tipo de cáncer de hígado, sinónimos de hep - 53.4 y 53.4, que facilitan la identificación y la cita cruzada, el carcinoma hepatocelular es un gran problema de salud que permite un estudio preciso de sus vías moleculares, interacciones celulares y estrategias terapéuticas, células originarias de musculus (ratones) que proporcionan un sistema de modelos relevante para entender y desarrollar tratamientos para el carcinoma hepatocelular.

Uso celular:Solo para investigación científica

Fecha de entrega celular: al contado, aproximadamente 1 semana

Precauciones

1. digestión convencional y recolección de centrifugación celular.

2. después de la centrifugación, retire el sobrenadante interior del tubo centrífuga, agregue alrededor de 1 ml de células de suspensión pesada y mezcle bien. se recomienda sacudir suavemente o soplar suavemente las células, colocarlas en una incubadora para digerir las células y luego digerirlas durante aproximadamente 1 minuto.

3. después de la digestión, sople suavemente la suspensión celular con una pistola de pipeta para dispersar la masa celular, agregue rápidamente 3 - 5 ml de medio de cultivo que contiene suero para mezclar bien para terminar la digestión y eliminar por centrifugación.

4. agregue alrededor de 5 ml del medio de cultivo correspondiente de la célula y mezcle bien, y conecte el frasco de cultivo / placa de Petri proporcionalmente.

5. observar bajo un microscopio si las células se convierten en células individuales uniformes y dispersas. si hay una pequeña cantidad de pequeñas masas celulares formadas en grupos, no es necesario volver a digerir, de modo que después de adherirse a la pared, las células se disiparán después de que el crecimiento celular se estabilice.

Envío a temperatura ambiente

Después de recibir, las botellas t25 se desinfectan y luego se colocan en la incubadora para Dejar reposar durante 2 - 3 horas, observar la densidad y el estado, tomar fotos de 2 - 3 comentarios a las ventas, y la densidad se puede transmitir de generación en generación. La proporción de transmisión temprana es de 1: 2. cuando se transmita de nuevo después de crecer, se recomienda congelar una de las botellas enteras en un tubo de almacenamiento congelado de 1 ml, y la otra botella continúa transmitiéndose. después de congelar repetidamente 2 - 3, se ampliará para hacer experimentos para evitar que las emergencias causen la interrupción de las semillas.

Envío de hielo secoHay dos congeladores de envío celular convencionales, uno de recuperación y el otro de repuesto. cuando la Primera recuperación no tiene éxito, se recupera estrictamente de acuerdo con los requisitos del fabricante. si la recuperación no tiene éxito, se conservan inmediatamente fotos de recuperación para informarnos.

Hep - 53.4 células de cáncer de hígado de ratón

Células adherentes

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. añadir 0,25% (w / v) 0,53 mm EDTA al matraz de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml), colocarlo en una incubadora a 37 ° C para digerir durante 1 - 2 minutos (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de las células se redondean y se desprenden, llevarlo rápidamente de vuelta a la Mesa de operaciones y añadir 3 - 4 ml de medio que contiene 10% FBS después de golpear ligeramente el matraz para terminar la digestión.

3. mezclar suavemente y aspirar, centrifugar durante 3 - 5 min a 1000 rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. Dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri t25 / 6 cm en una proporción de 1: 2, añadir 6 - 8 ml de un nuevo medio de cultivo configurado de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se realiza en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

4. Criopreservación celular: después de recibir la célula, se recomienda congelar un lote de semillas celulares durante las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior.

5. el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por un medio de cultivo recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones para cultivar células.

Células suspendidas

Las células que crecen en suspensión pueden mantener el Estado de crecimiento celular agregando un medio de cultivo al frasco de cultivo. en general, el mantenimiento de la densidad celular en 1 × 10 ⁵ a 1 × 10 ⁶ por ML (diferentes células requieren diferentes densidades) puede mantener el crecimiento normal de las células. Si es necesario dividir el vial, se puede recoger la suspensión celular en un tubo centrífuga de 1000 rpm, centrifugar durante 5 minutos, descartar el sobrenadante, reponer 1 - 2 ml de medio de cultivo y volver a mezclar, y luego dividir la suspensión celular en el nuevo vial t25 en una proporción de 1: 2, añadir 6 - 8 ml de nuevo medio de cultivo configurado de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se lleva a cabo en una proporción de 1: 2 a 1: 4 de acuerdo con la situación real.

Forma de transporte

Baja temperatura: transporte de hielo seco empaquetado en congelador de 1 ML. después de recibir, el refrigerador de - 80 grados se conserva durante la noche y se transfiere al nitrógeno líquido o se recupera directamente. si se encuentra que el hielo seco se ha volatilizado limpio, la tapa del congelador se ha caído, la tapa del congelador está rota y las células están contaminadas, Póngase en contacto con nosotros de inmediato.

Temperatura ambiente: las células vivas recuperadas de t25 se envían a temperatura ambiente y se operan de acuerdo con el método de tratamiento después de la recepción celular después de la recepción.

Bioseguridad

1. todas las células animales se consideran potencialmente dañinas para la biología y deben operar en la Plataforma de bioseguridad secundaria. preste atención a la protección. todos los residuos líquidos y utensilios que han estado en contacto con esta célula deben ser esterilizados antes de que puedan ser desechados.

2. se recomienda usar siempre guantes protectores, ropa y máscaras protectoras al reanimar las células congeladas. Nota: el congelador Se filtrará cuando se sumerja en nitrógeno líquido y se llenará lentamente de nitrógeno líquido. Al descongelarse, la conversión del nitrógeno líquido en fase gaseosa puede provocar la explosión del recipiente o soplar su tapa con fuerzas peligrosas, produciendo así escombros voladores que causan daños humanos.

Atención especial

La célula crece bien en un medio de cultivo de dmem (que contiene 1,5g / lnahcho3), la mayoría de los cuales contienen concentraciones más altas de NaHCO3 (3,7g / l), y si se utiliza un medio de cultivo de dmem (3,7g / L nahco3) para cultivar células es necesario aumentar la concentración de CO2 (7% - 10%).