Kit humano de Caspasa 1 (casp1) con especies completas

Especies y géneros completos Kit humano de Caspasa 1 (casp1)
Introducción
Caspasa - 1 / enzima de conversión de la IL - 1 (ice) es una enzima evolutivamente conservadora que puede descomponer otras proteínas, como los precursores de la IL - 1beta y la IL - 18 de la citoquina inflamatoria y el inductor de la fiebre gasdermin d, en péptidos maduros activos. Una vez activada por la formación de un complejo inflamatorio, activa dos citocinas inflamatorias - la IL - 1beta y la IL - 18 - mediante la lisis, y dos citocinas inflamatorias activadas por Caspasa - 1 mediante la lisis de gasdermin d, una vía de muerte celular programada, que induce aún más la respuesta inflamatoria de las células vecinas. Las enfermedades relacionadas con casp1 incluyen la viruela bovina y la enfermedad de shigella. La inmunodeterminación humana casp1 de este Kit es un sandwich de fase sólida de tres pasos para medir casp1 humano en el sobrenadante de cultivo celular, suero y plasma. El kit contiene E. Coli que expresa casp1 humana recombinante y anticuerpos producidos contra proteínas recombinantes. Los resultados obtenidos con casp1 natural muestran una curva lineal paralela a la curva estándar obtenida con el estándar recombinante. Estos resultados sugieren que el kit se puede utilizar para determinar el valor de masa relativa de casp1 para personas naturales.

Principio de detección

El kit utiliza el método de sándwich de doble anticuerpoTecnología elisa: el paquete de anticuerpos capturados se coloca en la placa estándar de la enzima, se captura la muestra y el objeto a detectar casp1 en el objeto estándar, después de la incubación y limpieza, se añade el anticuerpo de detección marcado para la incubación y limpieza, formando un complejo inmunológico de "anticuerpo de captura - antígeno - anticuerpo de detección", y luego Se añade la enzima de peróxido de rábano picante acoplada a estreptomicina para la incubación, que se limpia después de la incubación, y luego se añade el líquido de color tmb, si el objeto a detectar en la muestra es azul, se añade el líquido de terminación para detener la reacción. Los componentes libres durante la prueba se lavaron y el valor de od se midió a 450 nm con un medidor de enzima, la profundidad del color fue proporcional al contenido del objeto a medir en la muestra, y la concentración de casp1 en la muestra se calculó dibujando la curva estándar.

Puntos clave de la operación

1. al mezclar soluciones proteicas, siempre se debe evitar la ampollas. Para evitar la contaminación cruzada, la cabeza de la pipeta debe cambiarse al agregar cada estándar, muestra y reactivo. Además, cada reactivo debe utilizar un recipiente separado.

2. asegúrese de que el reactivo se agregue ininterrumpidamente al agujero de la placa. Para garantizar resultados precisos, es necesario pegar la película de sellado en el paso de incubación.

3. cuando se utiliza una lavadora automática de placas, se puede mejorar la precisión de la determinación añadiendo un período de inmersión de 30 segundos después de agregar el amortiguador de lavado, o girando la placa 180 grados entre los pasos de lavado.

4. el agente de color debe mantenerse incoloro hasta que se agregue a la placa. Asegúrese de que el desarrollador de color no esté expuesto a la luz. El agente de color debe cambiar de incoloro a Azul.

5. el líquido de terminación debe añadirse a la placa en el mismo orden que el agente de color. Después de agregar el líquido de terminación, el color formado en el agujero cambiará de azul a amarillo. El agujero Verde indica que la solución de terminación no se mezcla completamente con la solución de matriz.

Otros materiales necesarios

1. El medidor de estándar enzimático incluye una longitud de onda de determinación de 450 nm, mientras que la longitud de onda de corrección de 600 - 680 nm es mejor;

2. pipeta y cabeza de pistola;

3. agua destilada o desionizada;

4. cilindro graduado de 100 - 1000 ml;

5. lavar botellas, descargar pistolas o máquinas automáticas de limpieza de microporos;

6. osciladores de placa microporosa de órbita horizontal, capaces de mantener una velocidad de 500 ± 50 rpm;

7. tubos de ensayo para diluir estándares y muestras.

Especies y géneros completos CistinaKit humano 1 (casp1)
Precauciones

1. el líquido de terminación proporcionado por este Kit es una solución de ácido sulfúrico diluido, que tiene cierta corrosividad y debe operarse con precaución.

2. algunos ingredientes de este Kit contienen conservantes que pueden causar reacciones alérgicas en la piel, y se debe usar una máscara para evitar la inhalación de niebla.

3. el agente de color B puede causar irritación de la piel, los ojos y las vías respiratorias, y se debe usar una máscara para evitar la inhalación de niebla.

4. use guantes protectores, artículos de protección ocular y facial y Lávese las manos después de procesarlos.

Preparación del reactivo

1. mantenga todos los reactivos a temperatura ambiente durante unos 30 minutos antes de usarlos.

2. configuración del detergente / diluyente: si el detergente / diluyente (20 ×) tiene precipitación cristalina, es necesario calentar todos los cristales a 37 ° C para disolverlos. Diluir con agua destilada 1: 20 (por ejemplo: 1 ml de detergente concentrado a 19 ml de agua destilada)

Configuración estándar

Extraer el estándar del kit y prepararse7 tubos de ensayo, primero de10 μg / mlProductos estándar..200 μl) absorber una cierta cantidad de diluyente de 1 × 1 a 500 ng / ML según sea necesario (ejemplo: 50 μl de líquido madre estándar + 950 μl de diluyente de 1 × 1 para preparar 1000 μl de estándar de concentración de 500 ng / ml), y luego agregar 500 μl de diluyente de 1 × 1 en seis tubos de ensayo, en los que el estándar de 500 ng / ML se diluye dos veces a seis gradientes, y preparar un total de siete concentraciones de estándar, a su vez:500% / ml, 250% / ml, 125% / ml, 62,5 ng / ml, 31,25 ng / ml, 15,625 ng / ml,Extraer de la solución estándar de concentraciónEl estándar de 500 μl se va al siguiente tubo de ensayo, se sopla suavemente y se mezcla bien, y así sucesivamente para la dilución de doble relación del estándar (como se muestra en la imagen), y el diluyente de 1 × se utiliza como estándar de concentración cero (0ng / ml)

Cálculo de los resultados

Calcular el promedio de los agujeros compuestos de los estándares y muestrasEl valor de od y restar el valor de od del agujero en blanco como valor de corrección. Con la concentración como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical, dibuja la curva estándar de la función lógica de cuatro parámetros en el papel de coordenada (el valor que elimina el Grupo en blanco al dibujar) o utiliza un software informático capaz de generar el ajuste de la curva de la lógica de cuatro parámetros (4 - p) para crear La curva estándar. Si el valor de od de la muestra está por encima del límite superior de la curva estándar, se debe volver a medir después de la dilución adecuada y multiplicar por el múltiplo de dilución correspondiente al calcular la concentración de la muestra..

Datos de ejemplo

Los siguientes datos y curvas son solo para referencia, y el experimentador debe establecer una curva estándar basada en sus propios datos experimentales.

La curva estándar mostrada en este gráfico es solo un ejemplo, y el cálculo de los resultados debe basarse en la curva estándar dibujada por el mismo estándar de prueba.
Sensibilidad

Después de la prueba de la muestra, la sensibilidad de detección de este Kit es3,91 ng/ml.

Especificidad

Este Kit determina que se pueden identificar personas naturales y recombinantesCASP1.

Otras proteínas relacionadas se preparan en el tampón de dilución como50ng/mL， Y se determina la reactividad cruzada. No se observaron reacciones cruzadas obvias.

Resumen de los pasos experimentales
1. agregue productos y muestras estándar, reaccione a 37 ° C para evitar la luz 1,5h y lave tres veces.

2. Añadir anticuerpos de detección,37 ° C para evitar la reacción de la luz durante 1 hora, lavar 4 veces.

3. Unión enzimática añadida,37 ° C para evitar la reacción de la luz durante 30 minutos, lavar 4 veces.

4. agregue una solución de color y evite la luz a 37 ° C durante 15 minutos.

5. añadir líquido de terminación y leer en 5 minutos

personaCistina1 (CASP1)El kit se utiliza para la detección cuantitativa de personas en el sobrenadante de cultivo celular, suero y plasma.CASP1Antes de usar este producto, debe leer este prospecto completamente., personasEl kit de Elisa es solo para investigación científica y no puede usarse en otros diagnósticos..