¿¿ cómo se deben seleccionar las condiciones experimentales del kit de Elisa de células humanas?

EnKit de Elisa de células humanasEntre ellos, es importante elegir diversas condiciones experimentales, entre ellas:

　　

1. selección de soportes sólidos: muchas sustancias se pueden utilizar como soportes sólidos, como cloruro de polivinilo, poliestireno, poliacrilamida, celulosa, etc. La forma puede ser cóncava, tubo de ensayo, cuentas, etc. En la actualidad, se utiliza comúnmente una placa cóncava de poliestireno de 40 agujeros. Independientemente del vector, se puede seleccionar antes de su uso: el paquete está cubierto con antígenos equivalentes, reacciona en las mismas condiciones experimentales, observa si la reacción de color es uniforme y juzga si su rendimiento de adsorción es bueno.

　　

2. selección de anticuerpos (o antígenos) envueltos: cuando los anticuerpos (o antígenos) se absorben en la superficie de un portador sólido, se requiere una buena pureza y, en general, un pH de entre 9,0 y 9,6. La temperatura de adsorción, el tiempo y la cantidad de proteínas también tienen ciertos efectos. Por lo general, se utiliza a 4 ° C durante 18 - 24 horas. Es necesario titular la concentración adecuada del sobre de proteínas: es decir, las diferentes concentraciones de proteínas (0,1, 1,0 y 10 μg / ml, etc.), observando los valores de Odd de las muestras positivas en las mismas condiciones de otras pruebas. Elija una concentración con un valor de odzui grande y una pequeña cantidad de proteína zui. Para la mayoría de las proteínas, suele ser de 1 - 10 μg / ML.

　　

3. selección de la concentración de trabajo de los anticuerpos estándar enzimáticos: primero, el título inicial se titula con un kit de Elisa de células humanas directas (véase la Sección de anticuerpos estándar enzimáticos). Luego se fijan otras condiciones o se utiliza el "método de matriz cuadrada" (recubrimiento, muestras de referencia de la muestra a medir y anticuerpos estándar enzimáticos con diferentes diluciones) para titular con precisión la concentración de trabajo en el sistema experimental formal.

　　

4. selección de sustratos enzimáticos y donantes de hidrógeno: la selección de donantes de hidrógeno requiere barato, seguro, reacciones de color obvias e incoloras. Algunos donantes de hidrógeno (como la oppo, etc.) tienen posibles efectos cancerígenos y deben protegerse. Si las condiciones lo permiten, se deben utilizar donantes de hidrógeno no cancerígenos y altamente sensibles, como tmb y abts, que actualmente son relativamente satisfactorios. Después de un período de acción del sustrato, se debe agregar un ácido fuerte o una base fuerte para detener la reacción. El tiempo general de acción del sustrato debe ser de 10 - 30 minutos. La solución del sustrato debe prepararse fresca, especialmente añadiendo H2O2 antes de su uso.