Kit de Mioglobina de ratón (myo / mb) proceso de operación elisa:

(1), se agregan 100 μ1 muestras a probar en cada agujero de la muestra a probar, y cada muestra está equipada con 3 agujeros paralelos; Se establecen dos agujeros de control negativos, cada uno más no tratado.

El lisado celular del Grupo fue de 100 μ1; Se estableció otro agujero de control en blanco y se agregó un lisado celular puro de 100 μ1.

(2) la placa estándar de la enzima se colocó a 4 ° C y el paquete se pasó la noche.

(3) lavado de placas: aspirar el líquido de reacción en el agujero seco, lavarlo con el líquido de lavado (después de llenar el líquido de lavado en el agujero de la placa, se tira), y luego llenar el líquido de lavado en la placa

Agujero, remojo durante 1 - 2 minutos, sacudido intermitentemente. Secar en papel absorbente de agua después de eliminar el líquido del agujero. Lavar repetidamente 3 - 4 veces.

(4) se añade pbs50 μ1 a cada agujero del agujero de control negativo, y se añade 50 μ1 al líquido de trabajo de anticuerpos AIF sin anticuerpos humanos diluido a 1: 500 a cada agujero del agujero de muestra y el agujero en blanco.

(5) la placa estándar de la enzima se coloca en una caja húmeda en una incubadora a 37 ° C y se incuba durante 60 minutos.

(6) lavado de placas, el mismo (4).

(7) añadir 1: 5000 diluido HRP - líquido de trabajo de anticuerpos antiinmunes de cabra marcado por cada agujero 100 mu1.

(8) la placa estándar de la enzima se coloca en una caja húmeda en una incubadora a 37 ° C y se incuba durante 60 minutos.

(9) lavado de placas, el mismo (4).

(10) añadir 100 μ1 de líquido de color tmb a cada agujero, mezclar suavemente durante 10 s y reaccionar en una zona oscura de 37 ° C durante 15 - 20 minutos.

(11) añadir 100 μ12mo1 / lh2s04 por agujero para terminar la reacción.

(12) medir el valor de absorción de luz de 450 nm V1 y el valor de absorción de luz de 630 nm v2, respectivamente, y el valor final de 0d medido es la diferencia entre los dos (v1 - v2) para reducir la absorción de luz del recipiente.

Interferencia óptica causada por arañazos o huellas dactilares.

(13) procesamiento de datos: después de obtener los valores de od de la muestra (s) y el control negativo (n), se calcula el valor de S / N. S / n > 2.1 es el criterio positivo.