Categorías de producto

Shanghai bangjing industrial co., Ltd.

Correo electrónico
3004965510@qq.com
Teléfono
15000017673
Dirección
Distrito de songjiang, Shanghai

¿¿ qué?Contacto Ahora

Kit de prueba MTT

NegociableActualización en02/17

modelo

Naturaleza del fabricante: Productores

Categoría de producto

Lugar de origen

Consulta en línea

Descripción general

Productos que MTT Test kits está vendiendo: PC - 3M (células humanas de cáncer de próstata) 5 ? 215; 106cells / botella ? 215; 2 - 295 (células humanas de Glioma maligno xg) 5 ? 215; 106cells / botella ? 215; 2smc - 1 (células de tumor pleural humano) 5 ? 215; 106cells / botella ? 215; 2sw1116 (células humanas de adenocarcinoma de colon) 5 ? 215; 106cells / botella ? 215; 2 - 13 (células de cáncer de esófago humano) 5 ? 215; 106cells / botella ? 215; 2

Detalles del producto

Parámetros del producto:

Nombre chino	Nombre en inglés	Especificaciones del producto	Número de producto
Kit de prueba MTT	Kit de ensayo MTT	500 veces	BJ-01X6322

El MTT es ampliamente utilizado para detectar el crecimiento celular, y su principio es que el MTT puede ser reducido por la deshidrogenasa en las mitocondrias de las células vivas para producir cristales de formazan de color morado oscuro, mientras que las células muertas no tienen esta actividad. Una vez disuelta la cristalización de formazan de color morado oscuro, se puede determinar su concentración determinando la absorción de luz a una longitud de onda de 490 nm, y de esto se especula que la vitalidad de la célula, cuanto más fuerte sea la proliferación celular, mayor será la absorción; Cuanto mayor sea la citotoxicidad, menor será la absorción.

Detalles del producto:

Características del producto:
1. la disolución de formezan con * puede disolver completamente formezan y reducir el error.
2. Fondo bajo, alta sensibilidad, amplio rango lineal y buena repetibilidad.
3. este producto es suficiente para 500 pruebas de microplaca (5 placas de cultivo de células de 96 agujeros).
4. se puede utilizar para la detección de la actividad de los factores bioactivos, la detección de medicamentos antitumorales, los ensayos de citotoxicidad, la determinación de la radiosensibilidad tumoral, etc.
Condiciones de almacenamiento: transporte a baja temperatura, conservación a - 20 ℃ (pero la solución B también se puede transportar y conservar a temperatura ambiente), con una validez de un año.
Método de uso:
La siguiente operación es una prueba para detectar la citotoxicidad, otras aplicaciones son similares o más simples (como la prueba de la curva de crecimiento), y los pasos de operación se pueden modificar ligeramente sobre esta base, por lo que ya no se detallan.
I. inoculación de células
1. digerir las células monocapas convergentes de acuerdo con el método digestivo convencional y recogerlas en un medio de cultivo que contiene suero.
2.200g centrifugación durante 5 minutos para recoger la precipitación celular.
3. las células se precipitan en suspensión pesada con medio de cultivo, se preparan en suspensión unicelular y se cuentan.
4. diluir las células entre 2,5 × 103 / ML y 5 × 10 / ML (dependiendo de la velocidad de crecimiento de la célula), si no se conoce el número de grados de crecimiento, generalmente se puede diluir a 1 × 10 / ML.
5. transferir una cantidad suficiente de suspensión celular a una placa de Petri (facilitar el muestreo con una pistola de drenaje). Una prueba MTT de una placa de 96 agujeros requiere aproximadamente 20 ml de suspensión celular.
6. añadir 200 μl de suspensión celular (para células normales) en el Centro positivo de cada agujero de la columna 2 - 11 eliminada de la placa de 96 agujeros con una pistola de drenaje. Si se trata de células tumorales, se añaden 100 μl de suspensión de células tumorales y 100 μl de medio de cultivo (el volumen total es de 200 μl). Nota: asegúrese de agregar la célula al Centro del agujero, de lo contrario la célula se reunirá en la esquina del agujero y afectará la prueba.
7. añadir medios de cultivo de volumen igual a la suspensión celular de seguimiento a los agujeros 1 y 12 eliminados de la placa de 96 agujeros con una pistola de drenaje. Los poros de la columna 1 servirán como control + medio de cultivo - célula + MTT (cero cuando se utiliza para medir la od), y el efecto de la columna 12 más medio de cultivo es reducir el efecto de los efectos marginales en la respuesta de la columna 11.
8. de acuerdo con el método convencional de cultivo celular, las células fueron incubadas a 37 ° C y 5% de CO2 durante 1 - 3 días, lo que permitió que las células entraran en un período de crecimiento exponencial.
II. tratamiento farmacológico
9. diluir el medicamento a ocho concentraciones a medir con un medio de cultivo (si no se conoce la concentración a medir, es necesario determinar con un ensayo previo), por lo general, un medicamento necesita hacer tres placas paralelas.
10. eliminar los medios de cultivo (sin tocar las células) en cada agujero de las columnas 2 a 11 (un total de 10) y conservar los medios de cultivo en cada agujero de las columnas 1 y 12.
11. añadir 200 μl de medio fresco a los poros de las columnas 2 y 11 (un total de 2), que servirán como control de + medio + fármaco celular.
12. añadir ocho fármacos a medir con un gradiente de concentración en cada agujero de las columnas 3 a 10 (un total de ocho), y añadir una concentración en cada columna.
13. de acuerdo con el método convencional, la placa de 96 agujeros continúa incubando a 37 ° C y 5% de CO2 durante un cierto período de tiempo, que es el tiempo en que las células son tratadas por medicamentos, que es decidido por el propio usuario.
14. una vez finalizado el tratamiento, se eliminó el medio de cultivo de todos los poros de las columnas 2 a 11 (un total de 10, todas con células) y se agregó un medio fresco de 100 μl.
15. el cambio diario de cultivo multiplica por 2 - 3 el número de células (el tiempo necesario varía según la célula).
III. recuento de células vivas
16. al final del crecimiento, después de eliminar el medio de cultivo en cada agujero de las columnas 1 a 11, se añaden 100 μl de medio fresco y 10 μl de solución a (incluido el componente mtt), se envuelve la placa de 96 agujeros en papel de aluminio y se coloca a 37 ° C y 5% de CO2 para continuar el cultivo Durante 4 - 8 horas. Nota: la solución a se solidificará a baja temperatura. antes de usarlo, colócalo a temperatura ambiente o bañarte en agua a 20 - 25 ° C hasta que se disuelva por completo. agitar bien y usarlo. El MTT es cancerígeno y debe operarse con guantes.
17. retire cuidadosamente el medio de cultivo en el agujero (incluida la solución a). debido a que el medio de cultivo puede afectar la absorción de luz, es mejor eliminarlo en la medida de lo posible.
18. añadir 100 μl de solución B por agujero y oscilar a baja velocidad en una mecedora durante 10 minutos para disolver completamente los cristales de formazan formados por mtt.
19. debido a la inestabilidad del producto, es necesario seleccionar inmediatamente 490 nm en el inmunodetector enzimático para determinar la absorción.
nota: ajuste a cero con la columna 1 de cada agujero (+ medio de cultivo - célula + control mtt).
20. contar el promedio de cada repetición procesada de la misma manera.
21. dibuja la curva con la concentración del medicamento como eje transversal y la absorción como eje longitudinal. Debido a que los valores absolutos de absorción varían mucho de un tratamiento a otro, generalmente es necesario convertirlos en tasas de inhibición del crecimiento (tomando como 100% el promedio de los datos de cada agujero de las columnas 2 y 11 sin fármacos), lo que facilita el cálculo del ic50 para la comparación de los efectos de varios tratamientos farmacológicos. Nota: si se mide la curva de crecimiento, el tiempo es el eje transversal. La curva de crecimiento normal generalmente presenta forma de s, mientras que la pendiente aumenta si tiene un efecto promotor.

Informe experimental:

I. aislamiento y cultivo:

1. en condiciones estériles, se extrae el tejido auricular de las ratas de SD de 1 - 3 días de edad, luego se limpia este bloque de tejido dos veces con PBS y finalmente se corta el tejido en aproximadamente 1 mm3;

2. añadir 4 ml de líquido digestivo enzimático (0,1% y 0,1% colagenasa tipo i) al bloque de tejido, suspender durante 10 segundos, digerir a 37 ° C durante 10 minutos, luego soplar con un gotero para hacer una suspensión unicelular, precipitar y recoger el suero naturalmente, y colocar a 4 ° C después de terminar la digestión con un medio de cultivo FBS que contiene 10%;

3. añadir 3 a 4 ml de líquido digestivo enzimático al tejido restante, suspender durante 10 segundos, digerir a 37 ° C durante 10 minutos, recoger el suero superior de acuerdo con el método anterior y terminar la digestión y colocarlo a 4 ° c. repetir este paso 2 - 3 veces hasta que el tejido * sea digerido;

4. filtrar el líquido digestivo celular con un tamiz de acero inoxidable de 200 mallas, centrifugar 1200r / MIN durante 10 minutos, descartar el sobrenadante, precipitar las células con suspensión de medio de cultivo que contiene 10% FBS dmem / f12, inocular en un frasco de cultivo de 25 cm 2, colocarlas a 37 ° C y cultivarlas en una incubadora de CO2 al 5%;

5. después de pegar la pared a una velocidad diferencial durante 1 hora, se succiona el medio de cultivo y se inocula en una placa de 6 agujeros para continuar el cultivo de acuerdo con las necesidades del experimento;

2. identificación por inmunofluorescencia:

1. cuando los miocitos auriculares crezcan hasta el 80% de fusión, abandone el medio de cultivo, lave las células 2 veces con PBS cultivados a temperatura ambiente, 10 minutos cada vez, y luego fije las células a temperatura ambiente durante 15 minutos con poliformaldehído al 4%;

2. el PBS enjuaga las células dos veces, 10 minutos cada vez, y luego penetra la película con un 0,1% de Tritón X - 100 a 4 ° C durante 15 minutos;

3. el PBS enjuaga las células dos veces, 10 minutos cada vez, y luego cierra las células con un 4% de BSA durante 30 minutos a temperatura ambiente;

4. diluir alfa - Acción un anticuerpo en una proporción de 1: 100, y luego colocarlo en un refrigerador a 4 ° C para incubar células durante la noche;

5. el PBS enjuaga las células tres veces, 10 minutos cada vez, diluye la resistencia secundaria a la alfa - Acción en una proporción de 1: 150 y las coloca durante 1 hora a 37 ° c;

6. enjuagar con PBS tres veces, 10 minutos cada vez, y finalmente observar la imagen bajo un microscopio fluorescente invertido y tomar una foto.

Pasos de la operación de cultivo:

1. retire la placa de vidrio de la tapa del 75% de etanol con pinzas de tapa y limpie con una tela de seda estéril sin gasa;

2. coloque suavemente las rodajas de vidrio de cubierta en una placa de cultivo de 6 agujeros (una pieza por agujero) o en una placa de Petri (2 - 3 piezas se pueden colocar en cada placa de petri);

3. irradiar 2 - 3 horas a 20 - 30 centímetros del rango de luz ultravioleta directa;

4. mueva la suspensión celular contada a la placa de cultivo para que la placa de cubierta * se sumerja en el medio de cultivo;

5. incubar la placa de cultivo a 37 ° C en una incubadora de baño de agua al 5% de CO2 durante 2 - 3 días. cuando las células adherentes crezcan hasta 2 / 3 del área en la parte inferior de la placa de cultivo, extraer la placa de cultivo, extraer suavemente la placa de vidrio con pinzas de tapa, enjuagar con agua destilada y realizar una fijación rápida y pruebas inmunocitoquímicas.

Puntos clave e instrucciones del experimento:

1. este método es adecuado para el cultivo de células adherentes, no para el cultivo de células suspendidas, que pueden utilizar el método de goteo;

2. las láminas de vidrio de tapa utilizadas deben ser de vidrio de alta calidad y ser tratadas con una solución de lavado de ácido crómico;

3. las pastillas de vidrio de cobertura son muy delgadas y frágiles, y la acción debe ser ligera al tomar y colocar las pastillas de vidrio de cobertura;

4. si se necesitan más células con el mismo Estado de crecimiento, se pueden usar placas de Petri más grandes, pero no demasiado grandes, para evitar el desperdicio de medios de cultivo y aumentar las probabilidades de contaminación;

5. si la capacidad de crecimiento de las células para adherirse a la pared es pobre, las láminas de vidrio se pueden remojar en una solución de polylisina al 0,5% durante 5 - 10 minutos y secar naturalmente.

Puntos clave de la operación:

1) calentar el medio de cultivo en una olla de baño de agua a 37 ° c; Prepare un tubo centrífuga estéril de 15 ML y agregue 8 ml de medio de cultivo precalentado.

2) retire las células congeladas del tanque de nitrógeno líquido y póngalo rápidamente en una olla de baño de agua a 37 ° C para volver a calentarse (se puede preparar un vaso de precipitados limpio, llene el agua a 37 ° c, y después de extraer el criodepósito celular, póngalo rápidamente en el vaso de precipitados y luego transfirirlo gradualmente a la olla de baño de agua). Sacudir suavemente el criodepósito para que las células puedan descongelarse en 1 a 2 Min * para que las células puedan pasar por el segmento de temperatura más vulnerable (- 5 a 0 ° c) lo antes posible. Tenga en cuenta que la boca del criodepósito no puede sumergirse en agua, y BRL (células hepáticas de rata) evita causar contaminación.

3) limpiar el criodepósito con un 75% de alcohol antes de colocarlo en una mesa ultralimpia, transferir las células del tubo al tubo centrífuga preparado y soplar suavemente el líquido para que las células se dispersen uniformemente, reducir la concentración de Dmso y evitar burbujas al soplar. Lavar la pared del tubo con un medio de cultivo fresco dos veces y transferirlo al tubo centrífuga.

4) centrifugar 800rpm durante 5 minutos, descartar el líquido superior, añadir un medio de cultivo fresco y soplar para hacer una suspensión celular.

5) transferir la suspensión celular al vial de células t25, añadir una cantidad adecuada de medio de cultivo, sacudir suavemente el vial de células para que las células se distribuyan uniformemente y colocarlo en una caja de temperatura para cultivarlo.

6) observar el crecimiento de las células adheridas a la pared al día siguiente y cambiar el medio de cultivo fresco para eliminar las células muertas. Continuar el cultivo y transmitirlo normalmente cuando las células crezcan hasta que se fusionen entre el 80% y el 90%. Por lo general, las células recién recuperadas necesitan pasar por 2 a 3 generaciones, y la vitalidad celular se recupera antes de que se puedan realizar experimentos posteriores.

Anticuerpos inhibidores de la enzima de conversión de la angiotensina 1

Anticuerpos contra el factor de transcripción de la apoptosis

Alfa - 1 anti - páncreas

Anticuerpos de la familia de proteínas de unión ATP 6

Anticuerpos G1 de la subclase de caja de unión a adenosina trifosfato

Anticuerpos contra el receptor de la Unión a la grasa 2

Anticuerpos contra la proteína angel1

Anticuerpos contra la proteína angel2

Anticuerpos contra la proteína ankle2

Anticuerpos contra la proteína anclada 1 específica de los testículos

Anticuerpos contra la proteína de dominio repetida de la proteína de anclaje 13b

Anticuerpos contra la proteína de dominio repetida de la proteína de anclaje 202a1

Anticuerpos contra la proteína de dominio repetida de anclaje 202a3

Proteína de dominio repetida de anclaje 22 anticuerpos

Proteína de dominio repetida de anclaje 50 anticuerpos

BC - 020 (células humanas de cáncer de mama) 5 × 106 células / botella × 2

BC - 021 (células humanas de cáncer de mama) 5 × 106 células / botella × 2

BC - 022 (células humanas de cáncer de mama) 5 × 106 células / botella × 2

Be (2) - m17 (células de neuroblastoma humano) 5 × 106 células / vial × 2

BGC - 803 (células de cáncer gástrico humano) 5 × 106 células / botella × 2

C918 (células de melanoma coroidea del ojo humano) 5 × 106 células / botella × 2

Cal - 27 (células escamosas de la lengua humana) 5 × 106 células / botella × 2

Ls 180 (células humanas de adenocarcinoma de colon) 5 × 106 células / vial × 2

CNE - 2z (células humanas de cáncer nasofaríngeo) 5 × 106 células / botella × 2

Kit de prueba MTTColo 201 (células humanas de adenocarcinoma colorrectal) 5 × 106 células / vial × 2

CW - 2 (células humanas de cáncer de colon) 5 × 106 células / botella × 2

CRT (células de Glioma humano) 5 × 106 células / vial × 2

D283 Med (células de Meduloblastoma cerebral humano) 5 × 106 células / botella × 2

Ea.hy926 (células de fusión de células de vena umbilical humana) 5 × 106 células / vial × 2

ECV - 304 (células endoteliales de la vena umbilical humana) 5 × 106 células / vial × 2

Ej (células humanas de cáncer de vejiga) 5 × 106 células / vial × 2

H - 97 (células humanas de cáncer de hígado altamente metastásico) 5 × 106 células / botella × 2

Producto similar Recomendar