Kit de detección de proliferación celular y Citotoxicidad mts

Nombre chino:Kit de detección de proliferación celular y Citotoxicidad mts

Nombre en inglés: mts Cell provision and cybotoxicity Detection kit

Especificaciones del producto: 500 veces
Número de producto: BJ - 01x6321

Mts es un nuevo compuesto de armadura, que pertenece al mismo derivado de triazol que mtt. El mts puede ser degradado por la deshidrogenasa mitocondrial en las células vivas para producir un Naan soluble en agua marrón, que a su vez puede determinar la proliferación celular determinando la absorción espectral del naan.

Protocolo de operación de cultivo celular:
I. preparación de los medios de cultivo y las condiciones de congelación del cultivo:
1) preparar el medio de cultivo F - 12k; Suero bovino fetal de alta calidad, 10%; Doble resistencia, 1%.
2) condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 ° c, humedad de la incubadora del 70% al 80%.
3) liofilizado: 90% suero, 10% dmso, listo para usar.
II. tratamiento celular:
1) células de reanimación: coloque rápidamente el criostorio que contiene 1 ml de suspensión celular en un baño de agua a 37 ° c (la superficie del agua debe estar por debajo de la tapa del criostorio) para Sacudirlo y descongelarlo, y mueva al tubo centrífuga de 15 ML preparado previamente que contiene un medio de cultivo de 4 ML para mezclar uniformemente. Centrifugar durante 4 minutos a 1000 rpm, descartar el líquido sobrenadante, añadir 1 ml de medio de cultivo y soplar bien. A continuación, todas las suspensiones celulares se trasladan a un frasco de cultivo que contiene un medio de cultivo de 5 ML para el cultivo durante la noche. Al día siguiente, cambie de líquido y compruebe la densidad celular.
2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión.

Métodos de cultivo celular:
1. transmisión celular: se puede transmitir cuando la densidad celular alcanza el 80 - 90%
① abandonar el sobrenadante de cultivo y lavarlo 1 - 2 veces con PBS o solución salina;
② añadir 2 ML 0,25% (botella t25), cubrir toda la botella o placa de petri, cubrirla y ponerla en una incubadora para su digestión;
③ después de 1 - 2 minutos, se observan las células bajo el microscopio, si la mayoría de las células se contraen y una pequeña cantidad de células se desprenden, se sopla suavemente para confirmar la digestión y se añade el medio de cultivo para terminar la digestión; Si la célula sigue pegada a la pared, vuelva a la incubadora para continuar digiriéndola hasta que se pueda soplar suavemente;
④ centrifugar la suspensión celular en unas 1000 RPM durante 4 minutos y descartarla en el líquido superior;
⑤ añadir el frasco de cultivo o la placa de Petri después de suspender con un medio de cultivo fresco, y añadir el frasco de cultivo t25 con un medio de cultivo de 6 - 8 ml;
Las células suspendidas se recogen directamente por centrifugación, y las células se precipitan y se dividen en un nuevo frasco de cultivo después de la suspensión pesada.
2. reanimación celular:
① sacudir y derretir rápidamente el criodepósito en agua tibia a 37 ° c, con un tiempo de aproximadamente 1 minuto, añadir un medio de cultivo de 4 - 5 ML y mezclar bien.
② centrifugar durante 4 minutos en unas 1000 rpm, descartar el líquido superior, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo para soplar bien, añadir la suspensión celular al frasco de cultivo y añadir un medio de cultivo adecuado.
3. Criopreservación celular: Criopreservación celular cuando el Estado de crecimiento celular es bueno
① descartar el sobrenadante de cultivo, lavarlo 1 - 2 veces con PBS o solución salina normal y añadir 1 ML 0,25% (vial t25)
② después de 1 - 2 minutos, las células se observaron bajo un microscopio, la mayoría de las células se redujeron y un pequeño número de células se desprendieron, soplaron suavemente para confirmar la digestión y se añadieron * medios de cultivo para terminar la digestión;
③ centrifugar la suspensión celular en unas 1000 RPM durante 4 minutos, descartarla y agregar 1 ml de liofilizado para suspender la célula;
④ coloque el tubo de almacenamiento congelado en la Caja de enfriamiento del programa, Póngalo en el refrigerador a - 80 ℃, y después de 4 horas, transfiera el tubo de almacenamiento congelado al tanque de nitrógeno líquido para su almacenamiento.

Tm3 (células estromales testiculares de ratón) 5 × 106 células / vial × 2

Tscca (células escamosas de la lengua humana) 5 × 106 células / vial × 2

U - 2 os (células humanas de osteosarcoma) 5 × 106 células / botella × 2

U251 (células de Glioma humano) 5 × 106 células / vial × 2

U - 87 mg (células de Glioma humano) 5 × 106 células / vial × 2

U - 937 (células de linfoma de células de tejido humano) 5 × 106 células / vial × 2

V79 (células pulmonares de hámster) 5 × 106 células / vial × 2

Vcap (células de cáncer de próstata humano) 5 × 106 células / botella × 2

Vero (células renales de mono verde africano) 5 × 106 células / botella × 2

Wi - 38 (células pulmonares embrionarias humanas) 5 × 106 células / vial × 2

Wish (células amnióticas humanas) 5 × 106 células / botella × 2

Y1 (y - 1) (células de la corteza suprarrenal del ratón) 5 × 106 células / vial × 2

Yac - 1 (células de linfoma de ratón) 5 × 106 células / vial × 2

ZR - 75 - 1 (células humanas de cáncer de mama) 5 × 106 células / botella × 2

ZR - 75 - 30 (células humanas de cáncer de mama) 5 × 106 células / botella × 2

16hbe (células similares al epitelio bronquial humano) 5 × 106 células / vial × 2

801 - d (células de cáncer de pulmón de células gigantes humanas) 5 × 106 células / botella × 2

A2 (células de cáncer quístico adenoide humano) 5 × 106 células / vial × 2

A - 427 (células humanas de cáncer de pulmón) 5 × 106 células / botella × 2

A - 498 (células de cáncer de riñón humano) 5 × 106 células / botella × 2

A875 (células de melanoma humano) 5 × 106 células / vial × 2

Anticuerpos contra la proteína 3 de la Hidrolasa alfa / beta pulmonar

Anticuerpos contra la subunidad 3 de la proteína de transporte de caja de unión a adenosina trifosfato

Anticuerpos contra la subunidad 5 de la proteína de transferencia de caja de unión a adenosina trifosfato

Anticuerpos contra la proteína adck1

Anticuerpos contra la proteína 4 del dominio de unión acil

Anticuerpos contra la enzima alfa / beta - 4

Anticuerpos contra la proteína adck2

Acetaldehído deshidrogenasa 16 anticuerpos A1 familiares

Anticuerpos contra la proteína 3 del dominio IgG de la molécula de adhesión

Anticuerpos contra la etanol deshidrogenasa 1

Anticuerpos contra la deshidratación del ácido delta - aminolevulínico

Anticuerpos contra la proteína 4 relacionada con la Esclerosis lateral muscular

Anticuerpos contra la macroglobulina Alfa 2

Anticuerpos contra la proteína accsl

Anticuerpos contra la AFP

Proteína de unión a la proteína precursora beta amiloide 3 anticuerpos

Anticuerpos contra la actuando en forma de estrella

Anticuerpos contra la proteína relacionada con el lupus eritematoso sistémico trex1

Anticuerpos contra la proteína proguanina trex1 del lupus eritematoso sistémico fosforilado

Anticuerpos trex1, proteína relacionada con el lupus eritematoso sistémico fosforilado

Kit de detección de proliferación celular y Citotoxicidad mtsAnticuerpos AP - 2 μchain 1 del Complejo proteico asociado a la cabeza

Anticuerpos AP - 2 μchain 1 del Complejo proteico asociado a la Unión fosforilada

Anticuerpos contra la proteína de adhesión de membrana 7

Protocolo de operación
1. añadir 100 μl / agujero de células a la placa de 96 agujeros, por lo general, el experimento de proliferación celular agrega 2000 células de 100 microlitros por agujero, y el experimento de Citotoxicidad agrega 500 a 10000 células de 100 microlitros por agujero (el número específico de células utilizadas por agujero debe decidirse en función del tamaño de la célula, la velocidad de proliferación celular, etc.). Se cultivó en una incubadora de células de CO2 al 5% a 37 ° C durante 24 horas.
2. Añadir una concentración adecuada de 0 a 10 μl de compuesto de prueba.
3. incubar 96 placas de agujero en una incubadora celular con 37 ° c, 5% de aire CO2 y 100% de humedad durante el tiempo adecuado.
4. diluir 5 × MTT en una solución de 1 × MTT con una dilución.
5. añadir 50 μl de solución de 1 × MTT por agujero e incubar a 37 ° C durante 4 horas para reducir el MTT a A.
6. retire el líquido sobrenadante, agregue 150 μl de Dmso a cada agujero para disolver a y agite bien con una sacudida plana.
7. El medidor de estándar enzimático detecta la densidad óptica de cada agujero a una longitud de onda de 570 nm (si no hay filtro de 570 nm, se puede utilizar un filtro de 560 - 600nm).
8. análisis de los resultados
a、 Tasa de supervivencia celular: restar el valor de od de cada agujero de prueba del valor de od de fondo (* medio de cultivo más mtt, sin células) o el valor de od del agujero de medicamento en blanco (* medio de cultivo más dilución diferente del medicamento probado más mtt, sin células), y tomar el valor de od de cada agujero repetido como promedio ± sd. la tasa de supervivencia celular se indica en T / c%, t es el valor de od de las células añadidas y c es el valor de od de las células de control. Tasa de supervivencia celular% = (células añadidas OD / células de control od) × 100
b、 Calcular la concentración del medicamento (ic50) a T / C = 50% y la concentración del medicamento a T / C = 10% (ic90)