Fibroblasto de la vesícula biliar humana

I. atributos básicos de la célula

Nombre de la célula:Fibroblasto de la vesícula biliar humana

Fuente del tejido: tejido de la vesícula biliar

Fuente del género: personas

Introducción celular: vesícula biliar,Es una estructura de bolsa en forma de pera ubicada detrás del hígado debajo de las costillas derechas, que tiene el efecto de concentrar y almacenar bilis. La pared de la vesícula biliar consta de tres capas: mucosa, capa muscular y membrana externa. Entre ellos, la capa de membrana externa está compuesta principalmente de fibrocitos.

Medio de cultivo: sistema de cultivo de fibrocitos primarios

Frecuencia de cambio de líquido: cambio de líquido cada 2 - 3 días

Características de crecimiento: cultivo pegado a la pared

Morfología celular: fusiforme largo, células irregulares

Características de la transmisión: las características celulares determinan la transmisión

Líquido digestivo:0,25% enzima blanca dan pancreática

Condiciones de cultivo: fase gaseosa: Aire, 95%; CO2 ，5%

2. método de uso:

Fibroblasto de la vesícula biliar humanaSe trata de una célula cultivada adherida a la pared, con forma de fusiforme largo y células irregulares. bajo el proceso de operación estándar del Departamento técnico, las características celulares transmisibles de la célula se determinan para la transmisión. Se recomienda que realice los experimentos pertinentes lo antes posible después de recibir la célula.

Después de recibir la célula, el cliente debe seguir el siguiente método.

1. retire el frasco de cultivo celular t25, desinfecte el cuerpo del frasco con un 75% de alcohol, retire la película de sellado y póngalo en una incubadora celular con 37 ° c, 5% de CO2 y humedad saturada para reposar durante 3 - 4 horas para estabilizar el Estado celular.

2. digestión celular adherente

1) aspirar el medio de cultivo en el frasco de cultivo celular t25 y limpiar la célula con PBS una vez;

2) añadir un 0,25% de líquido digestivo 1 ML al frasco de cultivo t25, girar ligeramente el frasco de cultivo hasta que el líquido digestivo cubra todo el Fondo del frasco de cultivo, aspirar el líquido digestivo excedente y bañarse 1 - 3 minutos a 37 ° c; Se observó bajo un microscopio invertido, y después de que la célula se redujo y redondeó, se agregó un medio de cultivo de 5 ML para terminar la digestión;

3) soplar y mezclar suavemente con una pajita, inocular el frasco de cultivo t25 en la proporción de paso, luego complementar el medio de cultivo fresco a 5 ML y colocarlo en una caja de cultivo celular con 37 ° c, 5% de CO2 y humedad saturada para el cultivo estático;

4) después de que la célula se adhiera a la pared, cultive y observe; Después de eso, cambie el medio de cultivo fresco de acuerdo con la frecuencia de cambio de líquido.

3. las células reciben y se caen

1) recoger todas las suspensiones celulares, 1000 rpm, centrifugar durante 5 min y conservar la precipitación;

2) añadir 0,25% de líquido digestivo 0,5 ML a la tubería centrífuga, suspender la precipitación y colocarlo a 37 ° C para digerir durante 3 minutos (o 4 ° C para enfriar durante 5 - 7 minutos); Después de la digestión, se añadieron 5 ml de medio de cultivo al tubo centrífuga para terminar la digestión;

3) después de 1000 rpm, centrifugar durante 5 minutos, descartar el sobrenadante, suspender la precipitación con un medio de cultivo de 5 ML y vacunarse en un nuevo frasco de cultivo;

4) después de que la célula se adhiera a la pared, cultive y observe; Después de eso, cambie el medio de cultivo fresco (precalentado a 37 ° c) de acuerdo con la frecuencia de cambio de líquido.

5) las células adheridas a la pared del vial original se tratan de acuerdo con la digestión normal.

4. experimentos celulares

Debido a la particularidad de la adherencia celular primaria, cuando las células primarias adheridas a la pared se transfieren a otros utensilios experimentales (como láminas de vidrio, placas de cultivo, placas de Petri de coque de polimerización, etc.) después de la digestión, es necesario envolver los utensilios experimentales para mejorar la adherencia celular y evitar que las células afecten el experimento porque no se adhieren bien; Las condiciones de la cubierta a menudo seleccionan colágeno de cola de rata.I (2 - 5 μg / cm2), polilisina pll (0,1 mg / ml), gelatina (0,1%), dependiendo del tipo de célula. Las células suspendidas / semisuspendidas no necesitan ser envueltas.

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Precauciones para el cultivo celular:

Los productos de la compañía solo se utilizan para la investigación científica.Precauciones sobre el cultivo de células primarias. El cultivo de células primarias es una tecnología experimental muy importante. dominar estas precauciones puede hacer que su experimento sea más suave.

En primer lugar, la operación aséptica es la clave. Asegúrese de mantener el ambiente de operación limpio y evitar la contaminación por bacterias o moho, de lo contrario el experimento fracasará.

En segundo lugar, también es importante elegir el medio de cultivo adecuado y el suero. Las diferentes células tienen diferentes necesidades de medios de cultivo y suero, por lo que es necesario seleccionar los medios de cultivo y suero adecuados en función del tipo de célula.

Además, es un componente del cultivo celular. Para prepararse fresco, también debe complementarse regularmente durante el almacenamiento.

En el proceso de cultivo celular, el cultivo estático también es muy importante. Las células necesitan un cierto tiempo para adaptarse al nuevo entorno después de la digestión y la separación, por lo que es necesario evitar la extracción frecuente de botellas de cultivo para la observación durante este período de tiempo.

Además, el tiempo de digestión también debe controlarse adecuadamente. Por lo general, se pueden digerir hasta que las partículas de tejido pequeño se puedan ver a simple vista, y el tiempo de digestión demasiado largo puede causar un agravamiento del daño celular y afectar la tasa de supervivencia del cultivo celular.

Finalmente, para algunos tipos especiales de células, puede ser necesario agregar algunos factores de crecimiento especiales para promover el crecimiento y la proliferación celular. Sin embargo, hay que tener en cuenta que el costo de estos factores de crecimiento suele ser mayor.

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