Células endoteliales de la arteria de la vesícula biliar humana

Células endoteliales de la arteria de la vesícula biliar humana

Atributos básicos de la célula:

Introducción celular: vesícula biliar,Es una estructura de bolsa en forma de pera ubicada detrás del hígado debajo de las costillas derechas, que tiene el efecto de concentrar y almacenar bilis. La pared de la vesícula biliar consta de tres capas: mucosa, capa muscular y membrana externa. La arteria está compuesta por la membrana interna, la membrana media y la membrana externa, en la que la membrana interna está compuesta principalmente de células endoteliales.

Medio de cultivo: sistema de cultivo de células endoteliales primarias

Frecuencia de cambio de líquido: cadaCambio de líquido una vez cada 2 - 3 días

Líquido digestivo:0,25% enzima blanca dan pancreática

Condiciones de cultivo: fase gaseosa: Aire, 95%; CO2 ，5%

Métodos de cultivo celular primario:

1. preparación: coloque todo tipo de productos de cultivo desinfectados en la Mesa de purificación y desinfecte con rayos ultravioleta durante 20 minutos. Lávese las manos y limpie las manos hasta el codo con un 75% de alcohol antes de comenzar el Trabajo.

2. diseño: encienda la lámpara de alcohol e instale el sombrero de la pajita.

3. tratamiento del tejido: coloque el bloque de tejido en un vaso de precipitados, Enjuague con solución Hanks de 2 a 3 veces y elimine la contaminación sanguínea; Si se sospecha que el tejido puede contaminarse, se puede colocar primero en una mezcla que contenga verde durante 30 a 60 minutos.

4. corte: cortar el tejido en bloques de 2 a 3 mm con tijeras oftalmológicas para facilitar la digestión. Añadir entre 30 y 50 veces más líquido que el total de bloques de tejido, y luego verterlo en un matraz triangular juntos, ligar la boca del matraz o taparlo con un tapón de goma.

5. digestión: se puede digerir en baño de agua a temperatura constante o en una incubadora de 37 ° c. la digestión debe sacudirse cada 20 minutos, como es mejor digerir con una batidora de temperatura constante electromagnética. El tiempo de digestión depende del tamaño del bloque tisular y la dureza del tejido.

6. separación: cuando se ve turbidez en el líquido digestivo durante la digestión, se puede aspirar un poco de líquido digestivo con una pajita para observar bajo el microscopio, si el tejido se ha dispersado en grupos celulares o células individuales, se termina inmediatamente la digestión y luego se filtran los bloques de tejido que aún no se han digerido completamente a través de Un tamiz adecuado de acero inoxidable. Centrifugar el líquido digestivo a baja velocidad (500 a 1000 rpm) durante 5 minutos, aspirar el suero superior y agregar una cantidad adecuada de medio de cultivo que contiene suero.

7. conteo: contar con una placa de conteo, como la densidad celular de la suspensión celular es demasiado grande, y después de complementar el medio de cultivo y ajustarlo, se carga en el frasco de cultivo. Para la mayoría de las células, el pH requiere un rango de 7,2 a 7,4, y el medio de cultivo es ligeramente rojo, como el color amarillo, lo que indica que el líquido se vuelve ácido y se puede ajustar con nahco3.

8. cultivo: cultivo en una incubadora de 36,5 ° c, si se cultiva con una incubadora de co2, la tapa de la botella debe aflojarse durante medio círculo.

Precauciones:

1. el cultivo se puede conservar durante 3 - 6 meses a 4 ° c.

2. durante el cultivo celular, preste atención a mantener la operación estéril.

3. durante el cultivo de paso, el tiempo de digestión no debe ser demasiado largo, de lo contrario afectará la adherencia celular a la pared y su estado de crecimiento.

4. se recomienda que los clientes tomen varias fotos celulares de cada múltiplo los primeros tres días después de recibir la célula para registrar el Estado de la célula y facilitar la comunicación con el Departamento técnico; Debido al transporte, las células sensibles individuales experimentarán inestabilidad, por favor póngase en contacto con nosotros a tiempo para informarnos detalladamente de la situación específica de las células, para que nuestros técnicos puedan rastrear, visitar de nuevo hasta que se resuelva el problema.

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