Linfocitos esplénicos de pescado

Linfocitos esplénicos de pescado

- sí.Atributos del producto:

- sí.Introducción celular:

La linfa del bazo de pescado se separa del tejido del bazo; El bazo es un gran órgano inmune del cuerpo que representa el total de tejido linfático del cuerpo.25%Contiene una gran cantidad de linfocitos y macrófagos, que son el Centro de la inmunidad celular y humoral del cuerpo. Situado en la profundidad del arco costal externo trasero de la zona costal de la temporada izquierda, con9- -11Costillas opuestas, eje largo y primer10Las costillas son consistentes. La superficie del diafragma es adyacente al diafragma y al seno frénico costal izquierdo, con estómago en la parte delantera, riñón izquierdo y glándulas suprarrenales izquierda en la parte posterior, y un órgano de células reticuloendoteliales suaves en el extremo inferior adyacente al surco esplénico del colon. Linfocitos..linfocitos) un componente celular importante de los glóbulos blancos producidos por los órganos linfoides y la función de respuesta inmune del cuerpo. Según las diferencias en su aparición y función, los órganos linfoides se pueden dividir en dos categorías: los órganos linfoides centrales (también conocidos como órganos linfoides primarios) y los órganos linfoides circundantes (también conocidos como órganos linfoides secundarios). Los primeros incluyen el tímico, la cápsula superior de la cavidad o sus órganos equivalentes (algunos piensan que en los mamíferos es médula ósea). Pueden proliferar constantemente los linfocitos sin estimulación antigénica y, una vez maduros, los transfieren a los órganos linfoides circundantes. Estos últimos incluyen bazo, ganglios linfáticos, etc. Los linfocitos maduros necesitan diferenciarse y proliferar dependiendo de la estimulación de antígenos, y luego desempeñar su función inmune.

- sí.Introducción al método:

La linfa del bazo de pescado aislada en el laboratorio se preparó mediante molienda mecánica combinada con centrifugación de gradiente de densidad, y el número total de células fue de aproximadamente5×10¿⁵ sí?células/Botella.

- sí.Pruebas de calidad:

La linfa del bazo de pescado aislada en el laboratorio fue probada y no contieneEl VIH-1,VHB,VHC, micoplasma, bacterias, levadura y hongos, etc.

- sí.Información de formación:

Medios de cultivo: incluyendoFBS,penicilina,estreptomicinaesperar

Frecuencia de cambio de líquido: cada2 - 3Cambiar el líquido una vez al día

Características de crecimiento: suspensión

Morfología celular: redonda

Características de transmisión: no proliferación; No transmitido de generación en generación

Líquido digestivo:0,25%

Condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire,95%V;CO2，5%

El ciclo de cultivo in vitro de la linfa del bazo de pescado es limitado; Se recomienda utilizar medios de crecimiento especiales de apoyo y métodos de operación correctos para el cultivo para garantizar un buen estado de cultivo de la célula.

Operaciones de cultivo celular:

1) células de reanimación:El criodepósito que contiene suspensión celular se sacude rápidamente y se descongela en un baño de agua a 37 ° c, y se mezcla uniformemente con un medio de cultivo de 4 ML. Centrifugar durante 4 minutos a 1000 rpm, descartar el líquido sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. A continuación, se añaden todas las suspensiones celulares al frasco de cultivo durante la noche (o se añade la suspensión celular a una placa de Petri de 10 cm, se añaden unos 8 ml del medio de cultivo y se cultiva durante la noche). Al día siguiente, cambie de líquido y compruebe la densidad celular.

2) transmisión celular:Si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de paso.

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. añadir 1 ml de líquido digestivo (0,25% TRYPSIN - 0,53 mm edta) en el frasco de cultivo, colocarlo en una incubadora a 37 ° C para digerir durante 1 - 2 minutos, y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de las células se redondean y se caen, llevarlo rápidamente de vuelta a la Mesa de operaciones, golpear ligeramente el frasco de cultivo y añadir una pequeña cantidad de medio de cultivo para terminar la digestión.

3. presione 6 - 8 ml / botella para complementar el medio de cultivo, revuelva suavemente y exprima, centrifuga durante 4 minutos en condiciones de 1000rpm, abandone el sobrenadante, agregue 1 - 2ml de medio de cultivo y sople bien.

4. dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2.

3) Criopreservación celular:Cuando la célula está en buen estado de crecimiento, se puede congelar la célula. Las siguientes botellas t25 son de la categoría;

1. al congelar la célula, después de descartar el medio de cultivo, se añade 1 ML después de limpiar el pbs, y después de que la célula se redondea y se cae, se añade 1 ml del medio de cultivo que contiene suero para terminar la digestión, que se puede contar con una placa de recuento de sangre.

2. eliminar el sobrenadante por centrifugación de 1000 RPM en 4 minutos. Añadir 1 ml de células de suspensión de suero, añadir suero y Dmso de acuerdo con el número de células, mezclar suavemente, la concentración final de Dmso es del 10%, la densidad celular no es inferior a 1x106 / ml, congelar 1 ml de suspensión celular en cada liofilizador, prestar atención al liofilizado para hacer un buen trabajo de identificación.

3. coloque el criodepósito en la Caja de enfriamiento del programa, Póngalo en el refrigerador de - 80 grados y pase al almacenamiento de nitrógeno líquido después de 2 horas. Registre la ubicación del congelador para recogerlo la próxima vez.

| precauciones:

1. después de recibir las células nucleares no rojas de la sangre, primero observe si el vial celular está intacto, si el medio de cultivo tiene fugas, turbidez y otros fenómenos, si hay los fenómenos anteriores, Póngase en contacto con nosotros a tiempo.

2. lea cuidadosamente las instrucciones de la célula para comprender la información relacionada con la célula, como la morfología celular, el medio de cultivo utilizado, la proporción de suero, las citocinas necesarias, etc., para garantizar las condiciones de cultivo celular *. Si hay un problema con la célula debido a las malas condiciones de cultivo *, la responsabilidad recae en el cliente.

3. limpie la superficie del vial celular con un 75% de alcohol y observe el Estado celular bajo un microscopio. Debido a problemas de transporte, una pequeña cantidad de células adheridas a la pared se caerán de la pared del frasco, las células se colocarán en una caja de cultivo y se cultivarán estáticamente durante 4 a 6 horas, y luego se extraerán para observación. En este momento, la mayoría de las células se adherirán a la pared. si la célula todavía no puede adherirse a la pared, mida la vitalidad celular con la tinción azul de esperanza. si se confirma que la vitalidad celular es normal, centrifugar la célula y cultivarla nuevamente con un medio fresco; Si los resultados de la tinción muestran que la célula es inactiva, tome una foto y Póngase en contacto con nosotros a tiempo. después de confirmar la información, le enviaremos de nuevo de forma gratuita.

4. después de que la célula se adhiera a la pared, vierta el medio de cultivo en el frasco celular y deje de 6 a 8 ML para mantener el cultivo normal de la célula, que se transmitirá normalmente cuando la confluencia celular de atcc CRL - 1711 (sf9) sea de alrededor del 80%.

5. se pide a los clientes que utilicen medios de cultivo en las mismas condiciones para el cultivo celular. El exceso de medio de cultivo en el frasco de cultivo se puede recoger para su uso posterior, y la célula se puede mezclar con el medio de cultivo propio del cliente en un cierto porcentaje al pasar, para que la célula se adapte gradualmente a las condiciones de cultivo.

6. se recomienda que los clientes tomen varias fotos de las células tres días antes de recibir las células para registrar el Estado de las células y facilitar la comunicación con el Departamento técnico. Debido al transporte, las células sensibles individuales experimentarán inestabilidad, por favor póngase en contacto con nosotros a tiempo para informarnos de la situación específica de las células, para que nuestros técnicos puedan rastrear la visita de regreso hasta que se resuelva el problema.

7. la célula es solo para uso científico.

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