Células madre mesenquimales hepáticas embrionarias de pato

Perfil de la célula:

El tronco mesenquimal del hígado embrionario de pato se aisló del tejido hepático embrionario; El hígado es un órgano del Cuerpo cuya función metabólica es la principal, y desempeña un papel en la eliminación de la oxidación, el almacenamiento de azúcar hepático y la síntesis de proteínas secretas en el cuerpo; El hígado también fabrica bilis en el sistema digestivo. El hígado es un órgano grande de las vísceras del cuerpo, ubicado en la posición abdominal del cuerpo, debajo del diafragma derecho, en el extremo anterior de la vesícula biliar y por delante del riñón derecho, por encima del estómago. El hígado es una gran glándula digestiva en el sistema digestivo del cuerpo, que es de color marrón rojizo.Vórganos en forma de U. El hígado es el órgano principal de la síntesis de urea y un órgano importante del metabolismo. Células madre mesenquimalesMSC) es una célula madre con un alto potencial de autorrenovación y diferenciación multidireccional. En diferentes condiciones de inducción, se puede diferenciar en células tisulares distintas de una variedad de células hematopoyéticas y tiene los efectos de apoyo hematopoyético, inmunomodulación y reparación de tejidos. Células madre mesenquimalesMSC) es una célula madre adulta con potencial de autorrenovación y diferenciación multidireccional, que se encuentra en la médula ósea, el tejido adiposo, la sangre del cordón umbilical y una variedad de tejidos fetales. Puede secretar una variedad de citocinas y factores de crecimiento, promoviendo células madre hematopoyéticas..HSC) proliferación y diferenciación.MSCTambién tiene efectos inmunomoduladores, antiinflamatorios y reparadores de tejidos que reducen la enfermedad de injerto contra huésped..GVHD) y otras complicaciones relacionadas con el trasplante. Las células no parenquimales del hígado embrionario contienenMSCY en una gran cantidad, puede convertirse en una célula semilla.

Introducción al método:

El secado mesenquimal del hígado embrionario de pato aislado en el laboratorio se utilizó-La colagenasa se prepara mediante un método digestivo combinado, y el número total de células es de aproximadamente5×10¿⁵ sí?células/Botella.

Pruebas de calidad:

Meridiano mesenquimal hepático de embrión de pato aislado de laboratorioCD44Identificación por inmunofluorescencia, con una pureza alcanzable90%Lo anterior y no contieneEl VIH-1,VHB,VHC, micoplasma, bacterias, levadura y hongos, etc.

Información de formación:

Medios de cultivo: incluyendoFBS,FEG,bFGF,penicilina,estreptomicinaesperar

Frecuencia de cambio de líquido: cada2 - 3Cambiar el líquido una vez al día

Características de crecimiento: pegado a la pared

Morfología celular: tipo de Fibroblasto

Características de la transmisión: transmisibles3 - 5Alrededor de la generación

Líquido digestivo:0,25%

Condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire,95%V;CO2，5%

El ciclo de cultivo in vitro del tronco mesenquimal del hígado embrionario de pato es limitado; Se recomienda utilizar medios de crecimiento especiales de apoyo y métodos de operación correctos para el cultivo para garantizar un buen estado de cultivo de la célula.

Pasos de transmisión celular:

Si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de paso.
1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.
2. añadir 2 ml de líquido digestivo (0,25% TRYPSIN - 0,53 mm edta) en el frasco de cultivo, colocarlo en una incubadora a 37 ° C para digerir durante 1 - 2 minutos, y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de las células se redondean y se caen, llevarlo rápidamente de vuelta a la Mesa de operaciones, golpear ligeramente el frasco de cultivo y añadir una pequeña cantidad de medio de cultivo para terminar la digestión.
3. presione 6 - 8 ml / botella para complementar el medio de cultivo, revuelva suavemente y exprima, centrifuga durante 4 minutos en condiciones de 1000rpm, abandone el sobrenadante, agregue 1 - 2ml de medio de cultivo y sople bien.
4. dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 5.

Pasos de reanimación celular:

El criodepósito que contenía 1 ml de suspensión celular se agitó rápidamente y se descongeló en un baño de agua a 37 ° c, y se agregó un medio de cultivo de 4 ML para mezclar uniformemente. Centrifugar durante 4 minutos a 1000 rpm, descartar el líquido sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. A continuación, se añaden todas las suspensiones celulares al frasco de cultivo durante la noche (o se añade la suspensión celular a una placa de Petri de 10 cm, se añaden unos 8 ml del medio de cultivo y se cultiva durante la noche). Al día siguiente, cambie de líquido y compruebe la densidad celular.

Pasos de Criopreservación celular:

Cuando la célula está en buen estado de crecimiento, se puede congelar la célula. Tomemos como ejemplo las siguientes botellas t25;
1. al congelar la célula, después de descartar el medio de cultivo, PBS limpia el Fondo de la botella 1 - 2 veces y agrega 1 ML. después de que la célula se redondea y se cae, agrega 2 ml del medio de cultivo para terminar la digestión, que se puede contar con una placa de recuento de sangre.
2.1000rpm se centrifuga durante 5 minutos para eliminar el desbridamiento. Resuspensión con suero, más Dmso hasta una concentración final del 10%. Después de agregar dmso, mezcle rápidamente y asigne al congelador de acuerdo con la cantidad de cada 1 ml, preste atención al congelador para hacer un buen trabajo de identificación. La compañía congela más de 1x106 células por célula criogénica.
3. coloque el criodepósito en la Caja de enfriamiento del programa, colócalo en el refrigerador de - 80 grados y transfiera al depósito de nitrógeno líquido al menos 2 horas después. Registre la ubicación del congelador para recogerlo la próxima vez.
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