La calidad de las muestras celulares está directamente relacionada con la fiabilidad y repetibilidad de los resultados experimentales. Shanghai cobori Biology le presentará sistemáticamente los puntos centrales de la preparación y conservación de muestras celulares, proporcionando a los investigadores una referencia operativa estandarizada, asegurando que las muestras celulares se conserven en el Estado más Jia y manteniendo sus características biológicas y valor experimental.
I. pasos clave en la preparación de muestras celulares
1. preparación previa a la preparación
- diseño experimental claro: determinar el Protocolo de preparación de acuerdo con el propósito experimental posterior (como proteoma, transcriptología, cultivo celular, etc.).
Preparación de reactivos y consumibles: todos los reactivos y consumibles que entran en contacto con las células deben ser estériles, libres de contaminación por nucleasa / proteasa
- preconfriamiento del equipo: preconfriamiento anticipado del rotor de la centrifugadora, el tubo de almacenamiento congelado, etc. a la temperatura adecuada
2. recolección y tratamiento de células
- Confirmación del Estado celular: asegúrese de que la célula se encuentra en un período de crecimiento logarítmico con una tasa de células vivas superior al 95%
- tratamiento suave: evite soplar violentamente y limpie con PBS preconfriados o solución salina
- tratamiento oportuno: tratamiento lo antes posible después de sacarlo de la incubadora para reducir la respuesta de estrés celular
3. requisitos especiales de tratamiento
- muestras de análisis de proteínas: añadir una mezcla de inhibidores de la proteasa para evitar la congelación y descongelación repetidas
Muestras de análisis de ácidos nucleicos: uso de consumibles sin rnase / dnase, adición de protectores de ARN
- muestra metabolómica: enfriamiento rápido de la actividad metabólica, uso de metanol preconfriado o líquido de enfriamiento especial
II. métodos y opciones de conservación celular
1. conservación a corto plazo (> 24 horas)
- conservación a 4 ° c: suspensión en medio de cultivo o tampón de Quan
- situación aplicable: experimentos como la medición en flujo, la imagen de células vivas, etc., realizados ese día
- precauciones: evitar la contaminación bacteriana, conservar herméticamente
2. conservación intermedia (1 semana - 1 mes)
- - conservación a 80 ° c: añadir un protector adecuado para la congelación
- se recomienda el liofilizado:
- cultivo celular: suero bovino fetal con un 10% de Dmso
- Análisis de proteínas: lisas que contienen inhibidores de la proteasa
- Análisis de ácidos nucleicos: reactivos de protección del ARN (como triazol o líquidos de conservación especiales)
3. conservación a largo plazo (> 1 mes)
- conservación de nitrógeno líquido (- 196 ° c): el método más Jia para mantener la actividad celular
- Procedimiento de congelación:
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1. enfriamiento del programa: 4 ° C durante 30 minutos → - 20 ° C durante 2 horas → - 80 ° C durante la noche
2. transferencia a fase gaseosa de nitrógeno líquido (- 150 ° c) conservación a largo plazo
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Selección del criodepósito: marcar la información celular, la fecha de crioalmacenamiento, el número de generaciones, el operador
III. puntos clave del control de calidad
1. detección de la actividad celular
- antes y después de la congelación, se realiza la prueba de teñido azul de trippan o MTT
- la actividad celular tras la reanimación debe ser superior al 80% (ideal superior al 90%)
2. control de la contaminación
- detección periódica de la contaminación por micoplasma
- observación a simple vista y microscopía de la contaminación por bacterias y hongos
- Identificación Str de contaminación cruzada celular
3. marcado y registro
- sistema de gestión de códigos bidimensionales o de códigos de barras
- registro detallado del origen celular, el proceso de procesamiento, el lugar de conservación
IV. soluciones a problemas comunes
| problemas | posibles causas | soluciones
| baja actividad celular después de la reanimación | el proceso de congelación se enfría demasiado rápido | use la Caja de enfriamiento del programa
| degradación proteica | inhibidores insuficientes de la proteasa | añadir una variedad de mezclas de inhibidores de la proteasa
| degradación del ARN | contaminación por rnase durante la operación | uso de consumibles sin rnase, tratamiento rápido
| contaminación por micoplasma | contaminación celular primaria o operativa | pruebas periódicas, uso de carroñeros de micoplasma
V. precauciones de Seguridad
1. bioseguridad: cumplir con los requisitos del nivel de bioseguridad correspondiente de acuerdo con el origen celular
2. operación de nitrógeno líquido: use una máscara protectora y guantes para evitar congelación
3. seguridad química: los reactivos como el Dmso se manejan adecuadamente para evitar el contacto directo con la piel
4. tratamiento de residuos: los residuos celulares se tratan de acuerdo con el proceso de tratamiento de materiales biopeligrosos
6. Resumen de los planes de conservación recomendados
Dirección de la aplicación | método de conservación recomendado | temperatura de conservación | tiempo de conservación esperado
Cultivo de reanimación celular | Dmso + Criopreservación sérica | nitrógeno líquido | Más de 10 años
| Western blot | lisado Ripa | - 80 ° C | 1 año
Extracción de ARN | rizol o protector de ARN | - 80 ° C | 6 meses
Metabolismo 80% metanol apagado | - 80 ℃ 3 meses
| medición en flujo | PBS con 2% de FBS | 4 ° C | 24 horas
7. sistema de gestión inteligente
Se recomienda que el laboratorio establezca un sistema de gestión electrónica de muestras celulares que incluya:
Seguimiento en tiempo real de la ubicación de la muestra
Actualización automática del registro de congelación / extracción
- controles y recordatorios periódicos de existencias
Recuperación rápida de la información de la muestra

Muestras celulares de alta calidad son la piedra angular del éxito del experimento. A través de procesos de preparación estandarizados y métodos de conservación científica, la integridad biológica de las muestras celulares se puede mantener al máximo. Con el desarrollo de nuevas tecnologías como el análisis unicelular y la transcriptología espacial, los requisitos para la calidad de las muestras celulares mejorarán aún más. El establecimiento de normas estrictas de gestión de muestras no es solo una necesidad para garantizar la fiabilidad de los experimentos actuales, sino también una inversión estratégica para reservar valiosos recursos biológicos para futuras investigaciones.