Cuantificación por fluorescenciaPCR()qPCRLa estandarización de datos es un paso clave para garantizar la precisión y comparabilidad de los resultados experimentales, principalmente relacionados con la selección genética de parámetros internos, ΔΔCtCálculo del método y control de calidad. El siguiente es un análisis detallado del proceso de estandarización:

I,Selección genética del ginseng interno:

Se seleccionaron uno o más genes estables de ginseng interno como base para la estandarización. Estos genes se expresan de manera estable en condiciones experimentales y no se ven afectados por el tratamiento experimental. Los genes comunes del ginseng interno incluyenGAPDHy βactina,RPL13AEspera.

Genes objetivo y genes de ginseng internoCtDeterminación del valor

a través deqPCRExperimento, determinando el gen objetivo y el gen del ginseng interno en cada muestra, respectivamente.CtValor.

II. proceso de estandarización de datos (conΔΔCtLey como ejemplo:

1、‌ calcular△CtValor

Fórmula:ΔCt = Ct(gen objetivo)- Ct(gen del ginseng interno).

Cada muestra debe tener al menos3Se repite la técnica secundaria y se toma el promedio para reducir el error.

2、‌ calcular△Ctvalor

Fórmula:ΔΔCt =ΔCt(grupo experimental)-ΔCt(grupo de control).

El Grupo de control suele ser un grupo no tratado o una muestra basal.

3、‌ cálculo de la expresión relativa

Fórmula: expresión relativa = 2^{-\Delta\Delta Ct}2−ΔΔCt.

Como resultado"La cantidad de expresión en el grupo control es1"Como referencia, el grupo experimental mostró un cambio de múltiplo.

3. control de calidad y precauciones:

1、- diseño experimental

Establecer comparación sin plantilla..NTC) y el control positivo, excluyendo la contaminación o la amplificación Anormal.

Después de diluir la plantilla, se añade el sistema de reacción en grandes cantidades para reducir el error de adición de muestra.

2、- Análisis de datos

Eliminar valores anormales: comoCtValor >.35O muestras con curvas de disolución anormales (picos múltiples).

Verificación de la eficiencia de amplificación: curva estándarR²＞0.98, pendiente-3.3±0.1.

3、- normas de presentación de informes

Es necesario marcar el nombre del gen del ginseng interno,ΔΔCtMétodos de cálculo y repeticiones biológicas.

IV. comunesqPCREl software de análisis de datos incluye:

1,Bio-Rad CFX Maestro

2,GraphPad Prisma

3,REn el idiomaqPCRpaquete

A través del proceso estandarizado anterior, se puede cuantificar con precisión el nivel de expresión del gen objetivo en diferentes muestras y evaluar el impacto del tratamiento experimental en la expresión del Gen.