Por lo general, podemos usarELISAHay varios tipos de muestras detectadas, como suero, plasma, orina, sobrenadante de cultivo celular o homogeneizado de tejido, etc. los diferentes tipos de muestras detectadas son tratados de manera diferente en la etapa inicial. El manejo correcto de las muestras es una garantíaELISAPasos para la corrección y precisión de la detección, a continuación se presenta brevemente el método de procesamiento de diferentes tipos de muestras.

1、 suero

El suero es Zui comúnmente utilizadoELISAEl procesamiento de un tipo de muestra detectada también es relativamente simple.

Recoger muestras de sangre con tubos de ensayo o centrífuga sin pirógeno y sin LPS y colocar el tubo de ensayo o centrífuga a temperatura ambiente2Horas o4ºC durante la noche para que el suero se desprenda. (la colocación inclinada del tubo de ensayo o centrífuga aumenta la sección transversal de la superficie líquida, lo que puede hacer que el suero se libere en mayor medida).4℃1000×gCentrifugadora20minutoRecoger cuidadosamente y limpiar. Se recomienda dividir el suero en varias partes.-20ºC o-80Conservar a ° C y evitar la congelación y descongelación repetidas.

Se debe evitar la Hemólisis durante la recolección de sangre, ya que los glóbulos rojos liberan sustancias con actividad de peroxidasa cuando se lisan.HRPMarcadoELISAHabrá un color no específico en la detección, lo que dará lugar a la inexactitud de la detección. Al mismo tiempo, se debe evitar la contaminación bacteriana, ya que el cuerpo bacteriano puede contener endógenos.HRPEsto conduce a un falso positivo en la prueba.

2、 Plasma

Se toman muestras de sangre con vasos sanguíneos o tubos centrífuga que contienen anticoagulantes, y después de la recolección de las muestras30 minutosdentro4℃ 1000×gCentrifugadora15 minutosTomar el suero superior es plasma. Dividir shangqing en varias copias,-20ºC o-80Conservar a ° C y evitar la congelación y descongelación repetidas. Evite usar muestras de Hemólisis o hiperlipidemia.

Los Anticoagulantes comunes sonEDTA, Heparina sódica y Citrato de sodio, etc., también se deben leer cuidadosamente las instrucciones del kit durante la prueba para comprobar si el kit tiene requisitos especiales para anticoagulantes.

3、 Sobrenadante de cultivo celular

Tomar el sobrenadante del Cultivo celular al tubo centrífuga,1000×gCentrifugadora20 minutosEliminar los fragmentos celulares y las impurezas, extraer el líquido superior,-20ºC o-80Conservar a ° C y evitar la congelación y descongelación repetidas.

4、 Lisado celular

1(...) Retire el medio de cultivo dentro de la placa de cultivo, digiera las células con Tripsina y agregue un medio de cultivo adecuado para soplar las células fuera de la placa de cultivo. Las células suspendidas se pueden omitir.

2(...) Recoger la suspensión celular,1000×gCentrifugadora10 minutosAbandonar el medio de cultivo y usar preconfriadoPBSRunning3Veces.

3(...) Añadir una cantidad adecuada de preconfriamientoPBSO el lisado celular (añadir un inhibidor de la proteasa antes del uso temporal) para suspender las células. Normalmente6La cantidad de células necesarias para un agujero en la placa de Poros150 a 250μL de PBSSuspensión pesada.

4(...) Poner la muestra en-20ºC o-80Grados celsius, congelar la muestra, luego descongelarla a temperatura ambiente, congelar y descongelar repetidamente varias veces, para que la célula se rompa completamente. También se puede triturar la muestra por ultrasonido para lograr el propósito de la lisis.

5(...) 4℃10000 × gCentrifugadora10 minutos, eliminar fragmentos celulares, extraer el líquido claro,-20ºC o-80Conservar a ° C y evitar la congelación y descongelación repetidas.

5, homogeneizado de tejido

1(...) Se usarán muestras de tejidoPBS (0,01)M, PH 7,4(...)Enjuagar y lavar la sangre o las impurezas residuales en la superficie del tejido.

2(...) Pesar el bloque de tejido, cortarlo después de registrarlo, y las piezas deben ser lo más pequeñas posible para facilitar una homogeneización más completa.

3(...) Añadir la Organización al preconfriado en un cierto porcentajePBS(añadir un inhibidor de la proteasa antes del uso temporal) homogeneizado, colocado sobre hielo o en un baño de hielo al homogeneizar. (generalmente por peso de la organización:PBSvolumen= 1: 9Homogeneización proporcional, por ejemplo1 gramoCorrespondencia de muestras de tejido9 mldePBSEl volumen específico se puede ajustar adecuadamente de acuerdo con las necesidades experimentales, y la concentración de la muestra se debe multiplicar por el múltiplo de dilución correspondiente después de la prueba)

4(...) Absorbe el líquido de homogeneización en el tubo centrífuga,4℃5000×gCentrifugadora5 ~ 10 minutos, limpiar,-20ºC o-80Conservar a ° C y evitar la congelación y descongelación repetidas.

6、 Otras muestras biológicas líquidas, como orina y saliva

1000×gCentrifugadora20 minutosSe puede detectar retirando el líquido superior.

En general, porqueELISASolo se puede detectar el contenido de proteínas solubles, por lo que se debe garantizar que todas las muestras sean líquidos aclarados y que las precipitaciones o suspensiones se eliminen por centrifugación.

Para garantizar la precisión de la prueba, se conserva en-20ºC o-80La muestra de ℃ está en1 a 6Detección dentro de los meses;4Las muestras conservadas en ° C deben estar en1Las pruebas se realizan dentro de la semana.

Además, se debe garantizar que las muestras no contenganNaN₃, porqueNaN₃InhibiráHRPActividad que conduce así a resultados falsos negativos.