1.2.1Estructura de los anticuerpos

Los anticuerpos son inmunoglobulinas que pueden unirse específicamente a los antígenos(inmunoglobulina, Ig).IgSe divide en cinco categorías, es decirIgG,IgA,IgM,IgDyIgE. relacionado con la inmunodeterminaciónIgPrincipalmenteIgGyIgM.IgPor dos cadenas ligeras..L) y dos cadenas pesadas..H) Composición unitaria.IgLa cadena ligera es la misma, hayκ()kappa) yLambda()Lambda) dos tipos. Cinco categoríasIgLa estructura de la cadena pesada es diferente, lo que determina que su antigenicidad también es diferente.IgGyIgMLas cadenas pesadas se llamanγ()gamma) cadenas yμ()Mu) cadena.

Cadena pesada y cadena ligeraNEl orden de disposición de los aminoácidos en el extremo varía según los diversos anticuerpos, llamados regiones variables, que se utilizan por separado.VHyVLIndica. Los dos constituyen el sitio de Unión de antígenos del anticuerpo, que solo coincide con el clúster determinante de antígenos correspondiente.La combinación y la Unión específica son la base estructural del antígeno de unión específica de anticuerpos.

IgGSe puede descomponer en tres segmentos por papaína, dos de los cuales son los mismos llamados fragmentos de Unión de antígenos.Fabuloso). CadaFabulosoTodos conservan la capacidad de unir antígenos, pero solo unoLos sitios de Unión de antígenos individuales son monovalentes y no presentan aglutinación ni precipitación después de unirse al antígeno. Otro tramo diceFcSegmento, sin actividad de anticuerpos, pero conIgG* antigenicidad.

IgGSe puede descomponer en dos fragmentos por pepsina, unoFabulosoGemelos, conocidosF()ab'(...)2, puede unirse a dos antígenos idénticos; Otro fragmento es similarFcY luego se descomponeSe convierte en polipéptidos de moléculas pequeñas y no es bioactivo.

IgMEs un pentamer compuesto por cinco monómeros, que contiene 10Cadenas pesadas y10Una cadena ligera con10Los valencias de Unión de antígenos individuales, debido a la influencia de la posición espacial, solo se manifiestan como cinco valencias de Unión de antígenos.IgMEl peso molecular es de aproximadamente900000,IgGEl peso molecular es de aproximadamente150000.

Después de que el Organismo se infecta con microorganismos, se produce primero.IgMAnticuerpos que luego se producenIgGAnticuerpos. Después de un tiempo,IgMLa cantidad de anticuerpos disminuye gradualmente y desaparece, mientrasIgGLos anticuerpos pueden persistir durante mucho tiempo y pueden durar años después de la enfermedad *.Durante mucho tiempo.

IgMLos anticuerpos son generalmente anticuerpos protectores que son inmunes. Por lo tantoIgMLa determinación de anticuerpos tiene un alto valor diagnóstico clínico para algunas enfermedades infecciosas, como la hepatitis A. La imagen de la derecha muestra la hepatitis A.En el suero del pacienteIgGAnticuerpos yIgMEl tiempo y el nivel de aparición de anticuerpos.

1.3Respuesta de antígenos y anticuerpos

1.3.1可逆性

El proceso por el que un antígeno se une a un anticuerpo para formar un complejo de anticuerpos antigénicos es un equilibrio dinámico, cuya fórmula de reacción es:

Ag+AbAg·Ab

Afinidad de los anticuerpos..afinidad) es la fuerza de unión inherente entre los anticuerpos antigénicos y se puede utilizar la constante de equilibrioKIndicó:

K=[Ag·Ab]/.[Ag] [Ab]

Ag·AbEl grado de desconexión yKEl valor está relacionado. El punto de Unión del antígeno de los anticuerpos de alta afinidad y el clúster determinante del antígeno son muy adecuados en la configuración espacial, y los dos se unen firmemente y no son fáciles de separar. DesconexiónLos antígenos o anticuerpos posteriores pueden mantener la estructura y actividad originales, por lo que los antígenos o anticuerpos se pueden purificar mediante cromatografía de afinidad. En el antisuero, específicoIgGLos anticuerpos solo representan el totalIgGcentroUna parte muy pequeña. Los anticuerpos específicos extraídos por cromatografía de afinidad, llamados anticuerpos puros por cromatografía de afinidad, se pueden aplicar a la inmunodeterminación para obtener mejores resultados.

1.3.2Proporción adecuada de Zui

La cantidad en la que se añade un antígeno incremental a una cantidad constante de anticuerpos para formar un complejo de anticuerpos (precipitación) se muestra en la figura.1 - 4. La parte pico de la curva es el rango adecuado para la proporción de anticuerpos antigénicos zui, llamada banda equivalente..zona de equivalencia). Antes y después de la banda equivalente, se trata de la banda de exceso de anticuerpos y la banda de exceso de antígenos, respectivamente. Si los antígenos o anticuerpos son extremadamente excesivos, no se forman sedimentos, en la inmunodeterminaciónSe llama fenómeno de cinturón..fenómeno de zona). La sobredosis de anticuerpos se llama zona anterior..prezone), la sobredosis de antígenos se llama zona posterior..postzona). En uso de métodos inmunológicos para determinar la resistenciaEn el momento original, se debe hacer que haya una cantidad suficiente de anticuerpos en el sistema de reacción, de lo contrario la cantidad medida será menor que el contenido real, e incluso habrá falsos negativos.

1.3.3Especificidad

La Unión de anticuerpos antigénicos solo ocurre esencialmente entre el determinante antigénico del antígeno y el sitio de Unión antigénica del anticuerpo. Debido a que los dos son complementarios en estructura química y configuración espacial, los antígenosLa respuesta de anticuerpos es altamente específica. Por ejemplo, el antígeno de superficie en el virus de la hepatitis B..HBsAg),eAntígenos..HBeAg) y anticuerpos centrales..HBcAg) con el mismo virus, pero solo unido a sus anticuerpos correspondientes y no con los otros dosReacción. Esta especificidad de la respuesta de antígenos y anticuerpos permite a la inmunodeterminación determinar una sustancia específica en un compuesto proteico muy complejo, como el suero, sin tener que separar primero el objeto a detectar..

Pero esta especificidad tampoco. Si los dos compuestos tienen parcialmente la misma estructura, pueden aparecer reacciones cruzadas en la respuesta de antígenos y anticuerpos. Por ejemplo: gonadotrofina coriónicahCG) y la Hormona luteinizanteLH) todos porαyβConsta de dos subunidades cuya estructura es diferenteβUnidades secundarias, mientras que las dosαLas subunidades son similares. usarhCGInmunizaciónEl antisuero obtenido por los animales contienealfa-hCGY resistirβ-hCGDos anticuerpos, antialfa-hCGLos anticuerpos se asociarán conLHEn
αSe produce una reacción cruzada en la posición de la enzima. En las pruebas clínicas, como el uso de resistenciashCGEl antisuero se utiliza como reactivo de diagnóstico de embarazo para verificar la orina.hCG, solo se puede usarhCGEnsayo de mayor concentración, de lo contrarioTrazas de excreción fisiológica en la orina de las mujeresLHHabrá una reacción cruzada con ella. Por lo tanto, como diagnóstico de embarazo temprano (la sensibilidad debe alcanzar50 mIU/mlhCG) en la práctica debeLa aplicación solo es correctahCGResistencia específicaβ-hCGPara evitar reacciones cruzadas con otras hormonas.

1.3.4Sensibilidad

Al determinar el contenido de una sustancia en el suero, la sensibilidad del método colorimétrico químico esmg por mlNivel, la sensibilidad del método de determinación de la reacción enzimática es aproximadamente5 ~ 10μg / mlLa sensibilidad del método de difusión de gel y el método de turbidez en la inmunodeterminación es similar a la del método de reacción enzimática. Exención de marcasLa sensibilidad de la determinación de la epidemia puede aumentar miles de veces hastade ng/mlNivel. Por ejemplo, mediante Radioinmunoensayo o inmunoensayo enzimáticoHBsAgCon una sensibilidad de hasta0.1ng / ml.

1.4Aplicación de la inmunodeterminación en pruebas clínicas

Debido a que varios componentes antigénicos, incluidos los haptens de moléculas pequeñas, se pueden utilizar para preparar antisueros específicos o anticuerpos monoclonales, el uso de este anticuerpo como reactivo puede detectar los antígenos correspondientes en la muestra.Por lo tanto, la inmunodeterminación tiene una amplia gama de aplicaciones y se puede utilizar para la determinación en pruebas clínicas:

1)Diversas proteínas en los fluidos corporales, incluidas proteínas con cantidades muy pequeñas como la alfa - fetoproteína.

2)Hormonas, incluidas las hormonas esteroideas de bajo peso molecular, etc.

3)Antibióticos y medicamentos.

4)Antígenos patógenos,HBsAg,HBeAgEspera.

5)Además, también se pueden utilizar antígenos purificados para detectar anticuerpos en muestras, como anticuerposHBsEspera.

5. inmunoensayo marcado

Como se mencionó anteriormente, la inmunodeterminación es un método de determinación muy sensible, que determina directamente la precipitación o turbidez formada después de la reacción de antígenos y anticuerpos, con una sensibilidad de hasta5 ~ 10μg / mlSin embargo, en las pruebas clínicas, el contenido de algunos de los sujetos a probar en la muestra está muy por debajo de este nivel, por lo que se deben buscar formas de aumentar la sensibilidad. La inmunodeterminación de la marca esLos antígenos o anticuerpos del reactivo de detección se etiquetan con sustancias trazables para mejorar la sensibilidad mediante la determinación de los marcadores. En Radioinmunoensayo e inmunoensayo enzimático, los marcadoresPara radionucleidos y enzimas, Zui calcula después la cantidad de material a detectar determinando la radiactividad y la actividad enzimática, y la sensibilidad puede aumentar cientos a miles de veces en comparación con la determinación directa de sedimentos. En la inmunodeterminación marcada,Por lo general, se agrega un exceso de reactivos de marcado para garantizar la reacción con el objeto a probar *. Para marcar anticuerpos..Ab^{¿※ sí?}) detección de antígenosAg) por ejemplo, la fórmula de reacción es la siguiente:

Ag + Ab^{¿※ sí?} AgAb^{¿※ sí?}+ Ab^{¿※ sí?}

En los productos de reacción hayAgCombinadoAb^{¿※ sí?}Y libre yAb^{¿※ sí?} Si el marcador se determina sin separar los dos, el resultado medido será la suma de los dos. Por lo tanto, la separación de los marcadores libres de los marcadores de unión es un paso importante en la inmunodeterminación de marcadores. ExtraíbleCon una variedad de medios, el portador de fase sólida es uno de ellos. Por ejemplo, el paquete de antígenos o anticuerpos se coloca en un vector sólido y luego reacciona directamente con el antígeno o anticuerpo marcado, y el marcador Unido se fija al portador.En el cuerpo, mientras que el marcador libre se queda en la solución. De esta manera, se puede liberar lavando.Ab^{¿※ sí?}La eliminación, la determinación del marcador de Unión se puede realizar en fase sólida.

6. inmunoensayo enzimático

Inmunoensayo enzimático..inmunoensayo enzimático) se puede dividir en fase homogénea..homogéneo) y desigual..heterogéneo) dos tipos. En fase homogéneaEIAZhongkeLos marcadores se determinan directamente sin la separación de los marcadores libres y combinados. Por ejemplo, bajo ciertas condiciones, la pérdida de la enzima en el complejo de anticuerpos de antígenos marcado por la enzima formada después de la reacción de anticuerpos de antígenosSu actividad sobre el sustrato, por lo que la actividad enzimática medida refleja directamente los marcadores enzimáticos libres. HomogeneidadEIAMenos aplicación en pruebas clínicas. HeterogeneidadEIAPrimero hay que hacer una suma libre.Separación de marcadores combinados. Como se mencionó anteriormente, el portador sólido puede usarse como un medio de separación. Este método de inmunoensayo enzimático de fase sólida se encuentra en1971Zui se llama inmunoadsorbente vinculado a enzimas cuando se estableció por primera vez.Determinación..Ensayo inmunosorbente enlazado enzimáticamente), abreviaturaELISASi hay una traducción de la prueba de inmunoabsorción enzimática en china, aunque el significado no es exacto, se ha utilizado habitualmente.