Este Kit solo puede usarse para investigación científica y no para diagnóstico médico.

Ratones()Ratón(...)Fragmento de complemento del factor I 3b (ic3b)Kit de prueba Elisa

Manual de instrucciones

Principio de detección

El kit se utilizó la prueba de inmunoabsorción enzimática (elisa) con sándwich de un solo paso de doble kàng cuerpo. En los microporos de la envuelta del fragmento del complemento del factor I 3b (ic3b) kàng, se añaden sucesivamente especímenes, estándares, cuerpos de detección marcados con HRP kàng, que se crían a temperatura y se lavan con chèdi. Con el sustrato tmb para colorear, el tmb se convierte en azul catalizado por la peróxido y en amarillo final bajo la acción del ácido. La oscuridad del color se relacionó positivamente con el fragmento del complemento del factor I 3b (ic3b) en la muestra. La Absorbancia (valor de do) se determina a una longitud de onda de 450 nm con un medidor estándar enzimático y se calcula la concentración de la muestra.

Métodos de recogida, tratamiento y conservación de muestras

1. suero: use un tubo de ensayo libre de pirógenos y Lps para evitar cualquier estimulación celular durante la operación. después de recoger la sangre, 3.000 centrifugadoras giran durante 10 minutos para separar el suero y los glóbulos rojos de manera rápida y cuidadosa.

2. plasma: anticoagulación con edta, Citrato o heparina. Centrifugar a 3000 RPM durante 30 minutos para despejar.

3. sobrenadante celular: 3.000 centrifugadoras durante 10 minutos para eliminar partículas y polímeros.

4. homogeneización del tejido: añadir el tejido con una cantidad adecuada de solución salina normal y triturarlo. Centrifugar a 3000 RPM durante 10 minutos para despejar.

5. conservación: si la muestra no se detecta a tiempo después de la recolección, envuélvela de acuerdo con una dosis, congelarla a - 20 ° c, evitar la congelación y descongelación repetidas, descongelarla a temperatura ambiente y asegurarse de que la muestra se cargue, descomponga y congele uniformemente.

Artículos de propiedad propia

1. medidor de estándar enzimático (450 nm)

2. muestreador de alta precisión y cabeza de pistola: 0,5 - 10ul, 2 - 20ul, 20 - 200ul, 200 - 1000ul

3. incubadora de 37 ° C

Precauciones operativas

1. el kit se conserva a 2 - 8 ° C y se equilibra la temperatura ambiente anterior durante 20 minutos. El detergente concentrado extraído del refrigerador tendrá cristalización, lo cual es normal, y el calentamiento del baño de agua hace que la cristalización se disuelva por completo antes de usarla.

2. las tiras que no se utilizan en el experimento deben colocarse inmediatamente de nuevo en la bolsa selfie y conservarse selladas (secas a baja temperatura).

3. el estándar S0 con una concentración de 0 puede considerarse un control negativo o un vacío; Al operar de acuerdo con las instrucciones, la muestra se ha diluido cinco veces, y el resultado final multiplicado por cinco es la concentración real de la muestra.

4. siga estrictamente el tiempo, la cantidad de líquido y el orden indicados en las instrucciones para llevar a cabo la operación de calentamiento y crianza.

5. agitar bien todos los componentes líquidos antes de usarlos.

Composición del kit

Nota: la concentración del producto estándar (s0 - s5) es: 0, 12,5, 25, 50, 100, 200 ng / ML.

Preparación del reactivo

Dilución de 20 × amortiguador de lavado: el agua destilada se diluye a 1: 20, es decir, una parte del amortiguador de lavado de 20 × más 19 Partes del agua destilada.

Método de lavado de placas

1. lavado manual de la placa: lavar el líquido en el agujero, llenar el líquido de lavado en cada agujero, Dejar reposar durante 1 minuto y tirar el líquido en el agujero, secar el papel absorbente de agua, lavar la placa 5 veces.

2. lavadora automática de placas: inyección de 350 μl de líquido de lavado por agujero, remojo durante 1 min y lavado de placas 5 veces.

Pasos de operación

1. retire las tiras necesarias de la bolsa de papel de aluminio después de equilibrar la temperatura ambiente durante 20 minutos, y las tiras restantes se sellen y devuelvan a 4 ° c con una bolsa selfie.

2. establecer agujeros estándar y agujeros de muestra, cada uno de los cuales agrega 50 μl de estándares de diferentes concentraciones;

3. el agujero de la muestra se agrega primero con 10 μl de la muestra a medir, y luego con 40 μl de diluyente de la muestra; No se agregan agujeros en blanco.

4. además de los agujeros en blanco, cada agujero en el agujero estándar y el agujero de muestra se agrega 100 μl de kàng marcado por superóxidasa de rábano picante (hrp), el agujero de reacción se sella con una película de sellado, y el baño de agua a 37 ° c o la incubadora se cultiva a temperatura durante 60 minutos.

5. descartar el líquido, secar el papel absorbente de agua, llenar cada agujero con líquido de lavado, Dejar reposar durante 1 minuto, eliminar el líquido de lavado, secar el papel absorbente de agua, lavar la placa cinco veces así (también se puede lavar la placa con una lavadora).

6. añadir 50 μl de sustratos a y B a cada agujero e incubar a 37 ° C para evitar la luz durante 15 minutos.

7. añadir 50 μl de líquido de terminación a cada agujero y determinar el valor de od de cada agujero a una longitud de onda de 450 nm en 15 minutos.

Juicio de resultados

Dibuja la curva estándar: en la hoja de trabajo de microsoft, toma la concentración de productos estándar como coordenada horizontal y el valor de od correspondiente como coordenada vertical, dibuja la curva de regresión lineal de productos estándar y calcula el valor de concentración de cada muestra de acuerdo con la ecuación de la curva.

Rendimiento del kit

1. precisión: valor R del coeficiente de correlación entre la regresión lineal del producto estándar y la concentración esperada, mayor o igual a 09900.

2. sensibilidad: la concentración de detección baja de zuì es inferior a 1,0 ng / ML.

3. especificidad: no reacciona cruzadamente con otros análogos estructurales solubles.

4. repetibilidad: el coeficiente de variación dentro y entre las placas es inferior al 15%.

5. almacenamiento: 2 - 8 ° c, protegido de la luz y la humedad.

6. validez: 6 meses

Descargo de responsabilidad

1. el kit es solo para investigación y no debe usarse en experimentos clínicos o humanos, de lo contrario todas las consecuencias serán asumidas por el experimentador y la empresa no será responsable.

2. operar estrictamente de acuerdo con las instrucciones, el experimentador viola las instrucciones, y las consecuencias son asumidas por el experimentador.