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El efecto de uso de los instrumentos de detección de la peste porcina africana depende en gran medida de la normalización de la operación. Aunque los procesos operativos de los diferentes tipos de instrumentos son diferentes, el núcleo gira en torno a los tres enlaces centrales de "procesamiento de muestras - Operación de prueba - interpretación de resultados". el control de los detalles de cada paso afecta directamente la precisión de los resultados de la prueba, y los novatos deben prestar especial atención al operar.

Preparación antes de su uso. En primer lugar, es necesario comprobar el Estado del equipo, confirmar que la conexión de la fuente de alimentación es estable y el agujero de disipación de calor no está bloqueado. el instrumento PCR cuantitativo fluorescente debe activarse y calentarse con 30 minutos de antelación para garantizar la estabilidad del sistema de control de temperatura; El instrumento de detección rápida de oro coloide debe colocar el equipo y el reactivo a temperatura ambiente (20 - 25 ° c) con antelación para evitar que la temperatura demasiado baja afecte el efecto de reacción. Al mismo tiempo, es necesario preparar herramientas especiales de recolección de muestras, guantes desechables, etc., para hacer un buen trabajo de protección personal y evitar la contaminación cruzada de las muestras. La preparación del reactivo debe seguir estrictamente las instrucciones, descongelar lentamente los reactivos congelados, como los primeros y las sondas, en un baño de hielo, y mezclar suavemente al revés después del descongelamiento para evitar choques violentos que destruyan la actividad del reactivo.

Tomando como ejemplo los principales instrumentos de detección de PCR cuantitativo fluorescente, los pasos operativos centrales se pueden dividir en cuatro pasos. Es la recolección y el procesamiento de muestras, que es la base de la detección. Es necesario seleccionar el tipo de muestra adecuado de acuerdo con el propósito de la prueba, los cerdos vivos dan prioridad a la recolección anticoagulante, mientras que los cerdos enfermos y muertos eligen tejidos con alto contenido viral, como bazo y ganglios linfáticos. Las muestras recogidas se tratan con un lisado especial para extraer ácidos nucleicos a través de pasos como centrifugación, adsorción y elución. durante el proceso, la velocidad centrífuga (generalmente 12000 R / min) y el tiempo (3 - 5 minutos) deben controlarse estrictamente para garantizar la pureza de la extracción de ácidos nucleicos y evitar que impurezas como proteínas interfieran con las pruebas posteriores.

El segundo paso es la preparación del sistema de reacción, que es la clave para garantizar la precisión de la detección. En la Mesa de operaciones estéril, la plantilla de ácido nucleico extraída, el líquido de reacción PCR y el preparado enzimático se añaden al tubo de reacción a su vez proporcionalmente, y cada paso debe utilizar un nuevo pipeta para absorber la cabeza para evitar la contaminación cruzada. Después de la preparación del sistema, es necesario golpear suavemente el Fondo del tubo de reacción para mezclar el líquido, y luego centrifugar durante varios segundos para eliminar las burbujas de aire para evitar que las burbujas de aire afecten la adquisición de señales fluorescentes.

El tercer paso es la detección en la máquina y la configuración del programa. Coloque el tubo de reacción en la ranura de muestra del instrumento y preste atención a que el número corresponde a la información de la muestra. Establecer el procedimiento de detección de acuerdo con las instrucciones del reactivo, incluyendo etapas de pretransferencia (95 ° c, 30 segundos), desnaturalización (95 ° c, 5 segundos), extensión de recocido (60 ° c, 30 segundos), etc., el número de ciclos suele ser de 40, mientras se seleccionan los canales fluorescentes correspondientes (como los canales fam). Una vez finalizada la configuración del programa, se inicia la detección, evitando tocar el instrumento durante el proceso y evitando que el desplazamiento de la ranura de la muestra provoque el fracaso de la detección.

El cuarto paso es la interpretación y el registro de los resultados. Después de la prueba, el instrumento generará automáticamente la curva de amplificación y el valor de tc, y los criterios de juicio deben seguir estrictamente los requisitos del reactivo: el valor de TC ≤ 37 y la curva de amplificación es positiva en el tipo "s" típico; El valor de TC es superior a 37 o la curva de no amplificación es negativa; Si aparece una curva atípica, es necesario volver a probar y confirmar. Después de la finalización de la prueba, los datos deben exportarse a tiempo, y la información de la muestra, el tiempo de prueba, el Estado del instrumento y otros registros deben hacerse bien para facilitar la trazabilidad posterior.

El funcionamiento del instrumento de detección rápida de oro coloide es más simple y adecuado para la detección rápida a nivel de base. Después del tratamiento de la muestra, se absorbe una cantidad adecuada de gotas de muestra con una pajita y se agrega al agujero de muestra de la tira de prueba, y la cantidad de gotas se controla en 3 - 4 gotas para evitar el desbordamiento de líquido causado por el exceso. Observar los resultados después de 15 - 20 minutos de reposo: la línea de control de calidad y la línea de detección son positivas al mismo tiempo; Solo la línea de control de calidad es negativa; La ausencia de color de la línea de control de calidad significa que la prueba no es válida y que la tira de prueba debe reemplazarse para volver a probar. Después de su uso, las tiras de prueba y los contenedores de muestra usados deben tratarse de acuerdo con las especificaciones de residuos médicos para evitar la propagación del virus.