nombre del producto :Líquido de aislamiento de linfocitos de sangre periférica humana

Especificaciones del producto :200 ml

Condiciones de almacenamiento::RT， Evitar la luz

Período de validez:12 meses

Perfil del producto:Este producto es un líquido de separación de gradiente de densidad estéril y bajo nivel de LPS para aislar linfocitos de sangre periférica humana. Su principio de separación se basa en la diferencia de densidad de células sanguíneas (la densidad de glóbulos rojos y partículas es1,090 g/mlIzquierda y derecha; La densidad de linfocitos y monocitos es de1.075~1.090 g/mL; las plaquetas son1.030~1.035 g/mL) mediante centrifugación, las células de una cierta densidad se distribuyen en el gradiente de densidad correspondiente, separando así los linfocitos de la sangre periférica humana o de la sangre del cordón umbilical.

Indicadores del producto:Densidad1.077±0.001g/mlPresión osmótica290 ~ 350 mOsm / kg H2OEstéril0.1μmFiltración por membrana filtrante

Condiciones de conservación:Este producto es sensible a la luz y debe almacenarse a temperatura ambiente y protegido de la luz, con una vida útil.1 Año. Después de la apertura estéril, se conserva a temperatura ambiente.

Pasos de operación:1. Tomar sangre entera anticoagulante fresca..EDTASe puede anticoagular con Citrato de sodio o heparina) o sangre defibrasiva, con un volumen igual de sangre entera y diluyente de tejido oPBSDiluir toda la sangre.2. Añadir una cantidad adecuada de líquido de separación en el tubo centrífuga (cuando el volumen de sangre es menor después de la dilución)3 mlAl unirse3 mlLíquido de separación; Mayor o igual3 ml, añadir el líquido de separación de volumen igual. Sin embargo, el volumen total de los dos no puede exceder los dos tercios del tubo centrífuga, de lo contrario afectará el efecto de separación), extendiendo la sangre diluida por encima del nivel del líquido de separación, preste atención a mantener la interfaz clara entre los dos niveles. (se puede extraer la sangre con una pajita pasteurizada y luego colocarla cuidadosamente sobre el caldo de separación, ya que la diferencia de densidad entre los dos formará una clara interfaz estratificada. si hay más muestras añadidas durante más tiempo, es normal que los glóbulos rojos se hundan antes de la centrifugación).

3. Temperatura ambiente, rotor horizontal500~1000g, centrífuga20 ~ 30 minutos(cuanto mayor sea el volumen de la sangre, mayor será la fuerza centrífuga necesaria, centrífugaCuanto más tiempo dure, las mejores condiciones de separación deben explorarse y la velocidad máxima de centrifugación no debe exceder.1200g).4. Después de la centrifugación, habrá una estratificación obvia: la capa superior es la capa plasmática diluida, la capa intermedia es la capa líquida de separación transparente, y el plasma y los puntosLa capa de membrana blanca entre los líquidos de salida es la capa de linfocitos, y la parte inferior del tubo centrífuga es de glóbulos rojos y granos.5. Absorbe cuidadosamente las células de la membrana blanca hasta15 mlEn un tubo centrífuga limpio,10 ml de PBSO detergente celular para lavar las células de la membrana blanca.250g, centrífuga10 minutos.6. Abandonar shangqing,5 mldePBSO el líquido de limpieza celular suspende las células,250g, centrífuga10 minutos.7. Repita los pasos68. Abandona el suero superior y las células se vuelven a colgar.

Pureza de la separación:La pureza de aislamiento de los linfocitos aislados con separadores de linfocitos humanos es mayor que la90%.

Precauciones:A.Mezclar al revés antes de abrir. este líquido de separación es un producto estéril. para prolongar el tiempo de conservación del líquido de separación, abra el sello en condiciones estériles para evitar la contaminación microbiana..C. B.El líquido de separación siempre debe mantenerse a temperatura ambiente cuando se utiliza..18℃~ 25Grados celsius), si la temperatura interior es baja, se puede precalentar el líquido de separación.4La centrifugación a temperaturas más bajas puede causar un aumento de la contaminación de los glóbulos rojos en la capa de membrana blanca.C. ElLas muestras de sangre son preferiblemente Anticoagulantes frescos (recolección de sangre)2 horasInternamente), para mantener la actividad de los linfocitos, se debe evitar la congelación y refrigeración.D.Diluir la sangre o lavar las células, no se puede usar conCa,MgLos amortiguadores y medios de cultivo de iones, cuyos componentes pueden causar la aglutinación de células sanguíneas, reducen en gran medida la tasa de rendimiento celular y la pureza.El E.Algunos productos plásticos, como el poliestireno, pueden causar que las células cuelguen paredes debido a la acción estática que llevan, lo que afecta el efecto de separación.F.La viscosidad o la diferencia de temperatura de las muestras de sangre pueden afectar el efecto de separación, que puede ajustar la rotación centrífuga y el tiempo de centrifugación y explorar las mejores condiciones de separación.El G.La absorción excesiva de la capa de linfocitos y la capa de líquido de separación puede hacer que los granulados en la Unión del líquido de separación sean absorbidos, lo que aumenta el número de granulados mixtos; La absorción excesiva de capas de plasma puede causar contaminación de proteínas plasmáticas y plaquetas en los linfocitos.El H.Si se quiere seguir cultivando las células aisladas, se debe prestar atención a las operaciones estériles durante la recolección de sangre y el proceso de separación para evitar la contaminación microbiana.Yo.El coeficiente de dispersión celular y la carga celular de la sangre de diferentes animales en diferentes líquidos de separación de peso son diferentes. al formular el líquido de separación, el usuario debe proporcionar el peso específico del líquido de separación necesario, el género animal y el nombre de la célula aislada.