Optimizar los experimentos de ELISA para reducir el ruido de fondo es la clave para garantizar la precisión de los datos. Las siguientes experiencias experimentales se combinan para proporcionar sugerencias de optimización desde los enlaces centrales de cierre, lavado y selección de anticuerpos:

Optimización de las condiciones de cierre

El cierre es el paso central para reducir la Unión no específica y hay que tener en cuenta los siguientes puntos:

‌ selección de selladores‌ comúnmente se usa seroalbúmina bovina al 5% (bsa) o leche desnatada en polvo, en la que la BSA es adecuada para la mayoría de los casos, especialmente cuando la muestra contiene altas concentraciones de lípidos o hemólisis, se debe dar prioridad al uso de la BSA para evitar interferencias. Si se detecta la proteína fosforilada, se debe evitar el uso de leche desnatada en polvo que contiene caseína.

‌ tiempo de cierre y temperatura: por lo general, la temperatura ambiente está cerrada de 30 minutos a 2 horas, o 4 ° C durante la noche para mejorar la uniformidad. 37 ° C puede acelerar la reacción, pero hay que tener cuidado de evitar la evaporación.

Preparación de líquido de cierre: es necesario dispensarlo ahora para evitar la falla causada por la congelación y descongelación repetidas.

Optimización de los pasos de lavado

El lavado adecuado es la clave para reducir el fondo:

‌ selección de detergente: se recomienda el uso de un amortiguador PBS con un 0,05% de tween - 20 para eliminar sustancias no combinadas.

‌ número y tiempo de lavado: se recomienda lavar 3 - 5 veces, 2 - 3 minutos cada vez, para garantizar la eliminación de reactivos residuales.

Optimización de anticuerpos y reactivos

‌ calidad de los anticuerpos? Elija un anticuerpo y dos anticuerpos altamente específicos y optimice el múltiplo de dilución y el tiempo de incubación para evitar reacciones cruzadas.

Control de desarrollo: ajuste razonablemente la concentración y el tiempo de los reactivos de desarrollo para evitar el aumento del Fondo causado por el desarrollo excesivo.

Otras precauciones

‌ cantidad de carga de proteínas: asegúrese de que la calidad de las proteínas cargadas es adecuada y evite la Unión no específica causada por la carga excesiva.

‌ entorno experimental: evite la luz fuerte y directa, especialmente en la etapa de color y detección.