En el campo de la terapia celular, la eficiencia y estabilidad del cultivo de células T afectan directamente el éxito o el fracaso de la aplicación clínica. Como dos vectores de cultivo comunes, la placa de 96 agujeros y la placa de 6 agujeros no solo se reflejan en la escala, sino que también involucran detalles clave de la regulación del microambiente celular.

1. uniformidad de la vacunación celular

Las características de alto rendimiento de la placa de 96 agujeros requieren una distribución más precisa de la suspensión celular. Se recomienda utilizar un pipeta multicanal con centrifugación de baja velocidad (200 × g, 5 minutos) para promover la sedimentación celular y evitar el "efecto de borde" causado por la tensión superficial del líquido en los poros marginales. Por su parte, el volumen de un solo agujero de la placa de 6 agujeros es grande (2 - 4ml), por lo que es necesario mezclar manualmente con el "método de placa oscilante cruzada" para garantizar una distribución uniforme de las células.

2. estrategia de cambio de medios

La placa de 96 agujeros es fácil de perturbar las células adheridas a la pared al cambiar la mitad del líquido, y puede inclinarse en un ángulo de 45 ° para aspirar y descartar lentamente el líquido superior; Si se utiliza un medio libre de suero, es necesario agregar pegamento de matriz (como corning). ® Matriel) pegatinas mejoradas. La placa de 6 agujeros puede reemplazar el medio de cultivo al 50% primero a través del "método de intercambio de gradiente", y luego reemplazarlo en su totalidad después de 24 horas para reducir el estrés celular.

3. optimización del intercambio de gas

Cuando se apilan 96 placas de agujero para el cultivo, se recomienda una tapa de placa con película transpirable (como Greiner bio - One cellstar) ®）， Y controlar la pila de no más de 3 capas para evitar la falta de oxígeno en el agujero central. La placa de 6 agujeros se puede colocar directamente en una incubadora mixta de marea que contiene 5% de co2, pero se debe prestar atención a la distancia entre el borde de la placa de agujero y el ventilador de la Caja para evitar la evaporación excesiva local.

4. técnicas de monitoreo fenotípico

La placa de 96 agujeros recomienda el uso de sistemas de imágenes de alta connotación, como imagexpress micro, para el escaneo multipunto, eliminando automáticamente los datos de interferencia de burbujas a través de algoritmos de ia. La placa de 6 agujeros es más adecuada para la preamplificación antes de la clasificación por flujo, y se recomienda utilizar el "método de punción diagonal" para perforar tres veces seguidas a lo largo de la diagonal con una cabeza de pistola de 1 ML para garantizar la representatividad de la muestra.

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